组蛋白脱乙酰基酶8(HDAC8)重组蛋白

重组蛋白制备工艺优化策略

成分。5.优化表达条件（1）重组蛋白不表达或者表达量低。如果重组蛋白不表达（包含体和可溶蛋白都没有）通过改变诱导剂浓度，诱导温度，时间等都不表达的时候，然后尝试更换菌株、质粒载体。降低诱导后培养温度。重组蛋白表达得越慢，其折叠效果就越好，大肠杆菌在4℃时依然可以表达重组蛋白，而将培养温度降低至25-30℃就能显著改善蛋白折叠。此方法不适用于温度诱导的重组蛋白表达；减少诱导剂。诱导剂浓度可以降低至1/10；选用Lac渗透酶缺陷型菌株，如Tuner、Rosetta等，也有很好的效果。这类菌株能够使进入每个细胞

蛋白复性（二）-基因重组蛋白质的体外复性

蛋白、含二硫键蛋白在体外成功复性。 包涵体形成的原因 重组蛋白在宿主系统中高水平表达时，无论是原核表达体系或真核表达体系甚至高等真核表达体系，都会形成包涵体[2]。主要因为在重组蛋白的表达过程中，缺乏某些蛋白质折叠过程中需要的酶和辅助因子，或环境不适，无法形成正确的次级键等原因形成的[3]。 1、 表达量过高，研究发现在低表达时很少形成包涵体，表达量越高越容易形成包涵体。原因可能是合成速度太快，以至于没有足够的时间进行折叠，二硫键不能正确配对，过多的蛋白间的非特异

蛋白质结构与功能研究技术路线

域 / 折叠花样的总数是有限的。蛋白结构的模块化本质允许一级序列存在插入或删除。一般来说，结构域与功能一一对应（如 Kinase），但并不总是如此（如 TIM 桶），类似的结构可具有不同的功能 , 不同的结构可具有相似的功能。蛋白质结构与功能研究的技术路线如下：对整个技术路线，我们挑选其中的几个来讲一讲。首先就是蛋白结晶片段的选取，前面讲过，一般来说，蛋白质结构域与功能一一对应。因此，为了降低整个项目的难度（多个结构域会增加蛋白制备难度和结晶难度），通常会按照结构域选取蛋白质片段进行重组蛋白制备及结晶