- ￥666
- Elabscience
- E-CK-A331
- 中国
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
TUNEL In Situ Apoptosis Kit (HRP-DAB Method)
- 保质期：
1 年
- 供应商：
北京百奥创新科技有限公司
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
20 Assays/50 Assays/100 Assay
TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒（HRP-DAB显色法）
产品简介Elabscience® TUNEL In Situ Apoptosis Kit (HRP-DAB Method)， 灵敏度高、操作简便。本试剂盒适用于组织样本(石蜡切片、 冰冻切片)和细胞样本(细胞涂片、爬片)的原位凋亡检测，检测结果可通过普通光学显微镜观察。
检测原理
细胞在发生凋亡时，会激活一些特异性的 DNA 内切酶，这 些内切酶会切断核小体间的基因组 DNA，暴露的 3’-OH 可 在末端脱氧核酸转移酶(TdT)的催化下与生物素标记的 dUTP 连接，辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)可与生物素结合，在 HRP 的催化下通过 DAB 显色来观测凋亡细胞，结果可通过普通光学显微镜进行观察。
产品组分
检测样本类型
细胞样本 石蜡切片 冰冻切片
保存条件
-20 °C 保存，保质期一年。Streptavidin -HRP 和 DAB Concentrate (20×) 需避光保存。
自备试剂及仪器
1) 细胞样本
固定液：多聚jia醛用 PBS 稀释至浓度为 4%。 阻断剂：H2O2用去离子水稀释至浓度为 3%。
通透液：Triton X-100 用 PBS 稀释至浓度为 0.2%。该溶液建议提前 1~2 天配制并放在 4°C 保存。
2) 石蜡切片
二甲苯、无水乙醇。
阻断剂：H2O2用去离子水稀释至浓度为 3%。
3) 冰冻切片
固定液：多聚jia醛用 PBS 稀释至浓度为 4%。
阻断剂：H2O2用去离子水稀释至浓度为 3%。
4) 其他试剂
PBS、ddH2O、苏木素、中性树胶。
5) 仪器
光学显微镜。
实验流程
细胞样本 石蜡切片 冰冻切片
保存条件
-20 °C 保存，保质期一年。Streptavidin -HRP 和 DAB Concentrate (20×) 需避光保存。
自备试剂及仪器
1) 细胞样本
固定液：多聚jia醛用 PBS 稀释至浓度为 4%。 阻断剂：H2O2用去离子水稀释至浓度为 3%。
通透液：Triton X-100 用 PBS 稀释至浓度为 0.2%。该溶液建议提前 1~2 天配制并放在 4°C 保存。
2) 石蜡切片
二甲苯、无水乙醇。
阻断剂：H2O2用去离子水稀释至浓度为 3%。
3) 冰冻切片
固定液：多聚jia醛用 PBS 稀释至浓度为 4%。
阻断剂：H2O2用去离子水稀释至浓度为 3%。
4) 其他试剂
PBS、ddH2O、苏木素、中性树胶。
5) 仪器
光学显微镜。
实验流程
试剂配制
1) 1×蛋白酶 K 工作液 取 1 μL Proteinase K (100×) 加入 99 μL PBS 中，混匀。现用现配。
2) 1×DNase I Buffer 工作液 按照 9: 1 的比例用 ddH2O 将 DNase I Buffer (10×) 稀释待用。 现用现配。
3) DNase I 工作液（200 U/mL） 用 1×DNase I Buffer 工作液，按照 99: 1 稀释比将 DNase I (20 U/μL) 稀释待用。现用现配 。
注：DNase I 会在剧烈混合下变性，建议不要涡旋 DNase I 溶 液。
4) 1×DAB 工作液 按照 19:1 的比例用 DAB Dilution Buffer 将 DAB Concentrate (20×) 稀释待用。现用现配。
固定与通透
1. 细胞样本
1) 细胞爬片：将细胞爬片浸入 PBS 漂洗 1 次，滤纸吸干周 围水分，再浸入固定液（自备），室温固定 15~20 min 或 4°C 固定 1~2 h。
细胞涂片：收集细胞，加入一定体积的 PBS 重悬细胞沉淀，然后加入和 PBS 等体积的固定液（自备），室温固定 15~20 min 或 4°C 固定 1~2 h。600×g 离心 5 min，PBS 重悬，取 25~50 μL 细胞悬液涂片在载玻片上晾干。
注：细胞固定是 TUNEL 实验的重要步骤。未固定的细 胞可能会丢失较小的 DNA 片段，导致较低的信号。
2) 固定好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
3) 将样本浸入阻断剂（自备）中，室温（15~25°C）封闭 10 min。
4) 封闭好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
5) 将样本浸入通透液（自备）中，37°C 作用 10 min。
6) 将通透好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
2. 石蜡切片
1) 用常规方法将切片脱蜡水化。将切片浸入二甲苯（自备） 脱蜡 2 次，每次 10 min；无水乙醇（自备）浸泡切片 2 次，每次 5 min；90%、80%、70%的乙醇水溶液（自备） 各一次，每次 3 min。
注：低温可能影响二甲苯脱蜡效果。当室温低于 20°C 时，二甲苯脱蜡时间可延长至 20 min。
2) 脱蜡好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
3) 吸干切片组织周围的水分，每个样本上滴加 100 μL 1×Proteinase K 工作液，37°C 反应 20 min。
注：不同组织或物种的样本反应时间可能不同，建议进 行预实验，确定反应时间。
4) 将通透好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
5) 吸干切片周围的水分，样本浸入阻断剂（自备）中，室 温（15~25°C）封闭 10 min。
6) 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
3. 冰冻切片
1) 取出冰冻切片，平衡至室温，再浸入固定液（自备）， 室温（15~25°C）固定 30 min。
2) 固定好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
3) 每个样本上滴加 100 μL 1× Proteinase K 工作液，37°C 反 应 10~20 min。
注：不同组织或物种的样本反应时间可能不同，建议进 行预实验，确定反应时间。
4) 将通透好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
5) 吸干切片周围的水分后，样本浸入阻断剂（自备）中， 室温（15~25°C）封闭 10 min。
6) 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
标记和显色
1. 分组设置
1) 1×蛋白酶 K 工作液 取 1 μL Proteinase K (100×) 加入 99 μL PBS 中，混匀。现用现配。
2) 1×DNase I Buffer 工作液 按照 9: 1 的比例用 ddH2O 将 DNase I Buffer (10×) 稀释待用。 现用现配。
3) DNase I 工作液（200 U/mL） 用 1×DNase I Buffer 工作液，按照 99: 1 稀释比将 DNase I (20 U/μL) 稀释待用。现用现配 。
注：DNase I 会在剧烈混合下变性，建议不要涡旋 DNase I 溶 液。
4) 1×DAB 工作液 按照 19:1 的比例用 DAB Dilution Buffer 将 DAB Concentrate (20×) 稀释待用。现用现配。
固定与通透
1. 细胞样本
1) 细胞爬片：将细胞爬片浸入 PBS 漂洗 1 次，滤纸吸干周 围水分，再浸入固定液（自备），室温固定 15~20 min 或 4°C 固定 1~2 h。
细胞涂片：收集细胞，加入一定体积的 PBS 重悬细胞沉淀，然后加入和 PBS 等体积的固定液（自备），室温固定 15~20 min 或 4°C 固定 1~2 h。600×g 离心 5 min，PBS 重悬，取 25~50 μL 细胞悬液涂片在载玻片上晾干。
注：细胞固定是 TUNEL 实验的重要步骤。未固定的细 胞可能会丢失较小的 DNA 片段，导致较低的信号。
2) 固定好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
3) 将样本浸入阻断剂（自备）中，室温（15~25°C）封闭 10 min。
4) 封闭好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
5) 将样本浸入通透液（自备）中，37°C 作用 10 min。
6) 将通透好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
2. 石蜡切片
1) 用常规方法将切片脱蜡水化。将切片浸入二甲苯（自备） 脱蜡 2 次，每次 10 min；无水乙醇（自备）浸泡切片 2 次，每次 5 min；90%、80%、70%的乙醇水溶液（自备） 各一次，每次 3 min。
注：低温可能影响二甲苯脱蜡效果。当室温低于 20°C 时，二甲苯脱蜡时间可延长至 20 min。
2) 脱蜡好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
3) 吸干切片组织周围的水分，每个样本上滴加 100 μL 1×Proteinase K 工作液，37°C 反应 20 min。
注：不同组织或物种的样本反应时间可能不同，建议进 行预实验，确定反应时间。
4) 将通透好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
5) 吸干切片周围的水分，样本浸入阻断剂（自备）中，室 温（15~25°C）封闭 10 min。
6) 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
3. 冰冻切片
1) 取出冰冻切片，平衡至室温，再浸入固定液（自备）， 室温（15~25°C）固定 30 min。
2) 固定好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
3) 每个样本上滴加 100 μL 1× Proteinase K 工作液，37°C 反 应 10~20 min。
注：不同组织或物种的样本反应时间可能不同，建议进 行预实验，确定反应时间。
4) 将通透好的样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
5) 吸干切片周围的水分后，样本浸入阻断剂（自备）中， 室温（15~25°C）封闭 10 min。
6) 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
标记和显色
1. 分组设置
*TUNEL 检测时需设置阳性和阴性对照，以显示实验的客观 性及准确性。建议在每次实验中设置阳性对照和阴性对照。
注：阴性对照和阳性对照的制备可以同时进行。
阳性对照
1) 滴加 100 μL 1×DNase I Buffer 工作液到已通透的样本上, 室温平衡 5 min。
2) 用吸水纸去除样本上多余的液体。加入 100 μL 稀释后的 DNase I 工作液（200 U/mL)，37°C 孵育 10~30 min。
3) 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
阴性对照
1) 滴加 100 μL 1×DNase I Buffer 工作液到已通透的样本上, 室温平衡 5 min。
2) DNase I Buffer 孵育阴性样本，37°C 孵育 10~30 min。
3) 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
实验组
1） 实验组通透完成后在 PBS 中静置，等待阳性对照和阴性 对照处理后共同进行标记染色
2. 工作液的配制
1） TdT 酶工作液配制 参考下表配制适当 TdT 酶工作液，充分混匀，现用现配。
1) 滴加 100 μL 1×DNase I Buffer 工作液到已通透的样本上, 室温平衡 5 min。
2) 用吸水纸去除样本上多余的液体。加入 100 μL 稀释后的 DNase I 工作液（200 U/mL)，37°C 孵育 10~30 min。
3) 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
阴性对照
1) 滴加 100 μL 1×DNase I Buffer 工作液到已通透的样本上, 室温平衡 5 min。
2) DNase I Buffer 孵育阴性样本，37°C 孵育 10~30 min。
3) 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
实验组
1） 实验组通透完成后在 PBS 中静置，等待阳性对照和阴性 对照处理后共同进行标记染色
2. 工作液的配制
1） TdT 酶工作液配制 参考下表配制适当 TdT 酶工作液，充分混匀，现用现配。
注：
a) TdT Equilibration Buffer 使用前，室温静置直至完 全溶解。冰冻的平衡液融化后可能会出现钴盐结 晶，此为正常现象。使用前涡旋混匀。
b) TdT Enzyme 对温度较敏感，请严格保存于-20°C， 使用前取出，使用后立即放回。
c) 配制 TdT 酶工作液时，建议不要涡旋。
d) 通过在组织切片上倒扣盖玻片的方式（注意防止 搓动组织导致样本结构损伤）。
2） Streptavidin-HRP 工作液配制
参考下表配制适量的 Streptavidin-HRP 工作液，充分混匀， 现用现配。
a) TdT Equilibration Buffer 使用前，室温静置直至完 全溶解。冰冻的平衡液融化后可能会出现钴盐结 晶，此为正常现象。使用前涡旋混匀。
b) TdT Enzyme 对温度较敏感，请严格保存于-20°C， 使用前取出，使用后立即放回。
c) 配制 TdT 酶工作液时，建议不要涡旋。
d) 通过在组织切片上倒扣盖玻片的方式（注意防止 搓动组织导致样本结构损伤）。
2） Streptavidin-HRP 工作液配制
参考下表配制适量的 Streptavidin-HRP 工作液，充分混匀， 现用现配。
3. 标记和显色步骤
1. 每个样本滴加 100 μL TdT Equilibration Buffer ，37°C 湿 盒中平衡 10~30 min。
2. 吸水纸吸除 TdT Equilibration Buffer（注意不要干片）。 每个样本滴加 50 μL TdT 酶工作液，放入湿盒中 37°C 避光反应 60 min。
3. 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
4. 吸水纸吸干水分后滴加 100 μL Streptavidin-HRP 工作液， 放入湿盒中 37°C 避光反应 30 min。
5. 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。 注：可适当延长洗涤时间或洗涤次数，否则残留的 HRP 会增加染色背景。
6. 吸水纸吸干样本周围的水分，滴加 100 μL 的 1×DAB 工作液，室温孵育 30 s~5 min 或根据显色情况孵育适当 时间。
注：如果显色强，可在显微镜下观察到棕色即停止显色； 如显色弱，可适当延长显色时间。
7. 显色完成后样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
8. （选做）：苏木素染色液进行细胞核染色，随后用 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
9. 将切片置于水中冲洗后，将切片依次放入：70%酒精80%酒精-90%酒精-无水乙醇Ⅰ-无水乙醇Ⅱ-二甲苯Ⅰ- 二甲苯Ⅱ中脱水透明，每个试剂中放置 2 min，最后在 通风橱中风干切片。
10. 将中性树胶（自备）滴在组织旁边，并用盖玻片封片， 注意避免产生气泡，封好的切片水平置于通风橱中晾干。
11. 光学显微镜下观察、拍照。
注意事项
1. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用。
2. 请注意安全事项，遵守实验室试剂操作规范操作。
3. 洗涤过程应充分洗涤，否则会影响后续实验中酶的活性 （如 DNase I 和 TdT 酶）。用 PBS 清洗样本后，请用吸 水纸吸干样本周围的液体。
4. 实验过程中请保持样本的湿润，防止干片造成的实验失 败。
5. TdT 酶避免反复冻融，建议不要涡旋。
6. 本说明书中推荐的条件是通用的，用户可根据不同的样 本类型和预实验的结果，对样本处理时间、试剂浓度等 条件进行优化，选择最合适的实验条件
1. 每个样本滴加 100 μL TdT Equilibration Buffer ，37°C 湿 盒中平衡 10~30 min。
2. 吸水纸吸除 TdT Equilibration Buffer（注意不要干片）。 每个样本滴加 50 μL TdT 酶工作液，放入湿盒中 37°C 避光反应 60 min。
3. 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
4. 吸水纸吸干水分后滴加 100 μL Streptavidin-HRP 工作液， 放入湿盒中 37°C 避光反应 30 min。
5. 样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。 注：可适当延长洗涤时间或洗涤次数，否则残留的 HRP 会增加染色背景。
6. 吸水纸吸干样本周围的水分，滴加 100 μL 的 1×DAB 工作液，室温孵育 30 s~5 min 或根据显色情况孵育适当 时间。
注：如果显色强，可在显微镜下观察到棕色即停止显色； 如显色弱，可适当延长显色时间。
7. 显色完成后样本浸入 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
8. （选做）：苏木素染色液进行细胞核染色，随后用 PBS 漂洗 3 次，每次 5 min。
9. 将切片置于水中冲洗后，将切片依次放入：70%酒精80%酒精-90%酒精-无水乙醇Ⅰ-无水乙醇Ⅱ-二甲苯Ⅰ- 二甲苯Ⅱ中脱水透明，每个试剂中放置 2 min，最后在 通风橱中风干切片。
10. 将中性树胶（自备）滴在组织旁边，并用盖玻片封片， 注意避免产生气泡，封好的切片水平置于通风橱中晾干。
11. 光学显微镜下观察、拍照。
注意事项
1. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用。
2. 请注意安全事项，遵守实验室试剂操作规范操作。
3. 洗涤过程应充分洗涤，否则会影响后续实验中酶的活性 （如 DNase I 和 TdT 酶）。用 PBS 清洗样本后，请用吸 水纸吸干样本周围的液体。
4. 实验过程中请保持样本的湿润，防止干片造成的实验失 败。
5. TdT 酶避免反复冻融，建议不要涡旋。
6. 本说明书中推荐的条件是通用的，用户可根据不同的样 本类型和预实验的结果，对样本处理时间、试剂浓度等 条件进行优化，选择最合适的实验条件
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文献和实验该产品被引用文献
Effects of hydrogen-rich saline in neuroinflammation and mitochondrial dysfunction in rat model of sepsis-associated encephalopathy
相关实验
的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
素与生物素高度特异性结合的关系来放大免疫组化信号，但此方法有产生内源性生物素背景的可能性。而酶标聚合物法，利用聚合物与二抗结合，形成聚合物-二抗复合物，实现信号放大，该方法不受内源性生物素的干扰。 表 2 免疫组化多种检测系统分类 图 2 酶标聚合物法检测系统 图 3 链霉亲和素-生物素法检测系统 在显色法中，针对 HRP（辣根过氧化物酶）显色系统，其常用底物为DAB/AEC（HRP/DAB 呈棕褐色染色，具有很好的光稳定性，HRP/AEC 呈红色染色，在阳光下会褪色，不易保存。 基础 IHC
标记(TdT 2m ediatedx2dU TP n ick end labeling, TUN EL ) 技术, 是目前原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的新方法, 已广泛用于生物、医学研究领域。TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一种用来检测细胞凋亡(apoptosis)的分析方法.细胞凋亡有一项重要的特征为细胞内的DNA会碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探测DNA片段的产生,所以可以传达细胞凋亡
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
文献支持
TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒（HRP-DAB显色法）
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