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- 2025年07月12日
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信帆生物
（Cytochrome b5 分光光度法 50T/48 样）
一、测定意义：
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，对外源物质代谢具有重要的作用，尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5是P450酶系的两个血红素蛋白，其比值的变化与P450代谢活性密切相关。
二、测定原理：
氧化型细胞色素b5经连-二亚硫酸钠还原后，在424nm处有最大吸收，通过测定424nm和490nm的吸光度差异即可计算出细胞色素b5的含量。
三、仪器设备：
可见分光光度计、普通离心机、高速离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。
四、试剂组成：（50T/48 样）
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加100mL蒸馏水，充分溶解。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。
工作液配制：戴一次性手套小心打开试剂三瓶盖，加试剂二50mL充分溶解，4℃避光可保存一周。
五、操作步骤：
1、细胞色素 b5 提取：
⑴、除去线粒体、细胞核等大分子物质：称取 0.5g 组织，加入 1mL 试剂一冰水浴充分碾磨破碎，10000g4℃离心 30 分钟取上清转入高速离心管中。
⑵、粗制微粒体：100000g，4℃离心 60 分钟，弃上清。
⑶、除血红蛋白等杂质：向上步留的沉淀中加 1mL 的试剂一，盖紧后充分震荡溶解，10000g，4℃离心 30分钟，弃上清。
⑷、待测液：向上步留的沉淀中加试剂二 0.5mL，盖紧后充分震荡溶解，需要当天检测。
细胞色素 b5 检测试剂盒
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文献和实验细胞色素b5 存于高等动物内质网膜的一种细胞色素。可从兔肝微粒体中提纯。因为与膜结合，用蛋白酶或表面活性剂处理可以使其溶解。还原型和氧化型的最大吸收光谱分别为 555、 526、 423和 414毫微米，分子量为 12， 500，氧化还原电位＋ 0.02V。可由同样内质网膜内的还原酶通过 NADH进行还原。还原型 b5与被称为氰感受因子的酶一起，参与由氧将饱和酰基辅酶 A转变成不饱和酰基辅酶 A的脂肪酸不饱和化反应。
细胞色素b5存于高等动物内质网膜的一种细胞色素。可从兔肝微粒体中提纯。因为与膜结合，用蛋白酶或表面活性剂处理可以使其溶解。还原型和氧化型的最大吸收光谱分别为555、526、423和414毫微米，分子量为12500，氧化还原电位＋0.02V。可由同样内质网膜内的还原酶通过NADH进行还原。还原型b5与被称为氰感受因子的酶一起，参与由氧将饱和酰基辅酶A转变成不饱和酰基辅酶A的脂肪酸不饱和化反应。
月朗渔 我的试验是要先感染动物，再从动物体内取出待检测的细胞，测定细胞的凋亡。我现在做的有吉姆萨染色观察细胞形态、上流式检测早期和晚期细胞凋亡率。正准备做的有电镜观察细胞亚单位形态变化，caspase-9、caspase-3和细胞色素C释放的检测。因为我做的是线粒体途径的凋亡，所以选了这些指标，不知道是否合适？如果要排除死亡受体途径不知道还要检测哪些指标？还请各位高手指点一二。 月朗渔 怎么没人回啊？还请做过凋亡检测的朋友不吝
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