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MIF慢病毒含myc标签

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  • 2025年08月18日
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    • 英文名

      MIF

    • CAS号

      00002

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      -20°

    • 规格

      50ul

    基因调
    控方式
    基因名称 物种 基因ID 基因大小 转录本 载体名称 备注1
    过表达 MIF 4282 345bp NM-002415.2 pCDH-EF1a-CoGFP- PURO- SFFV-MIF -myc-WPRE 1.病毒量:≥1x108TU,病毒滴度:≥1x108TU/mL,Puro抗性元件, 约8-10管;
    2.
    含myc标签
    对照 CoGFP         pCDH-EF1a-CoGFP- PURO- SFFV-MCS WPRE 1.病毒量:≥1x108TU,病毒滴度:≥1x108TU/mL,Puro抗性元件,约8-10管;
     
    慢病毒感染快速指南
    1. 将目的细胞按 30%汇合度接种到 24 孔板,约 3-5×104细胞数/孔,不同细胞因为细胞大
    小不同细胞数量会不同,快速指南以细胞数量为 5×104为例,加入 500uL 完全培养基进行
    细胞培养。
    2. 接种后 12-20h 感染阴性对照慢病毒(接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长,否则细胞
    增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选)。
    3.加病毒量计算方法:(细胞数×MOI /病毒滴度)×103=病毒量(uL),加病毒量见下表。
    同时加入 Polybrene,每孔加 0.25uL,浓度为 10mg/mL Polybrene,细胞培养液中终浓度为
    5ug/mL
    病毒液滴度
    TU/mL
    MOI=10
    uL
    MOI=20
    uL
    MOI=40
    uL
    MOI=80
    uL
    MOI=100
    uL
    4×108TU/mL
    1.25uL
    2.5uL
    5uL
    10uL
    12.5ul
    4.感染 16-20h 后更换培养基,弃去培养基,每孔加入 500uL 新鲜的培养基。
    5.感染后 48-96h 显微镜观察荧光。(注:如果 48h-96h 期间细胞汇合度达到 100%,请及时
    传代培养)
    6.建议将 48 孔板细胞进行传代,传代 12 孔板,后继续观察荧光,根据细胞状态和荧光细
    胞比例综合判断细胞感染最佳 MOI 值。一般选择细胞生长良好,感染效率 80%左右的感染
    条件作为最佳感染条件。(注:100%荧光感染不一定为细胞最佳 MOI 值,因为可能会造成
    细胞慢病毒感染拷贝数太高,影响细胞状态)
     

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