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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
MIF
- CAS号：
00002
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
-20°
- 规格：
50ul
| 基因调 控方式 |
基因名称 | 物种 | 基因ID | 基因大小 | 转录本 | 载体名称 | 备注1 |
| 过表达 | MIF | 人 | 4282 | 345bp | NM-002415.2 | pCDH-EF1a-CoGFP- PURO- SFFV-MIF -myc-WPRE | 1.病毒量:≥1x108TU,病毒滴度:≥1x108TU/mL,Puro抗性元件, 约8-10管； 2.含myc标签 |
| 对照 | CoGFP | pCDH-EF1a-CoGFP- PURO- SFFV-MCS WPRE | 1.病毒量:≥1x108TU,病毒滴度:≥1x108TU/mL,Puro抗性元件,约8-10管; |
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文献和实验AAV 装载容量 4.7kb 超限怎么办？元件长度和五种扩容方案一篇讲清
小？ scAAV 为自互补双链，包装容量约为 ssAAV 的一半（约 2.4 kb），但起效更快。 超限后先试什么？ 先换短启动子、去标签，仍超再考虑双载体拆分或改慢病毒（大基因载体）。 大基因用什么病毒？ 明显超过 AAV 上限可转慢病毒，吉凯 GV747 大基因载体适合 >4 kb 基因（具体以官方为准）。 --- 主要公开来源 通用共识：AAV 包装容量 ssAAV < 4.7 kb（含 ITR 及目的序列），scAAV < 2.4 kb；ITR 为包装必需（见 AAV 载体设计文献）。 吉凯
要保护好自己，需要生物安全柜（往里吹风最好），或者超净台（把风给关了 （*^__^*））。（下图是慢病毒构建载体示意图）病毒来了，需要分装，-80 保存，反复冻融影响病毒活性，一般情况系，我是将病毒分成 10 ul 一管。其次是看清你自己的病毒情况，是荧光标记（一般 GFP），还是非荧光标记 （一般标签蛋白是过表达是 Flag，敲降是 scramble）。元元做的是肿瘤相关实验，所以咱们这里讲的是贴壁的肿瘤细胞的稳转，一定注意，元元讲的是普适的方法，一定要看厂家的说明书。一般先用带有 GFP 荧
病毒探 MOI、感染条件、表达窗口 10 选错载体 慢病毒硬转悬浮细胞、质粒做长期表达 按细胞类型+是否长期表达定载体（见下方对照） 几个最容易被低估的坑 坑 1：单位看错是最常见的低级错误。 慢病毒滴度用 TU/mL（转导单位），AAV 和腺病毒常用 vg 或 GC（基因组拷贝数），两者量级和含义都不同。抄别人文献的用量时，一定核对单位，不然 MOI 算出来差一个数量级，病毒打进去要么不够要么毒死细胞。 坑 2：表达框超容量。 AAV 装载容量约 4.7kb（含 ITR、启动子、标签
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