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α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Af)试剂盒,微板法

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  • ¥1540
  • wksubio
  • WS4170W
  • 国内
  • 2025年09月29日
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    • 英文名

      α- L-Arabinofuranosidase( α- L-Af) Kit

    • CAS号

      WS4170W

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase, α-Afa)试剂盒说明书
    (货号:WS4170W 微板法 48 样)
    一、产品简介:
    α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-AfaEC 3.2.1.55)是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残
    基的糖苷酶类,使细胞壁阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖不断解离,促进果胶
    的增溶和降解。由于果实成熟过程中常常伴随着阿拉伯糖的丧失,该酶活性在果实成熟软
    化中的研究具有重大意义。
    本试剂盒提供一种简单,灵敏,快速的测定方法,α-Afa分解对-硝基*阿拉伯呋喃糖
    苷生成对-硝基*酚,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率即可得出α-Afa
    酶活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制:
    三、所需的仪器和用品
    酶标仪、96 孔板、低温台式离心机、水浴锅、研钵、冰和蒸馏水。
    四、α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-Afa)活性测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本制备:
    ① 组织样本:称取约 0.2g 组织(水分充足的样本取 0.5g),加入 1mL 提取液,冰浴匀
    浆,然后 12000rpm4℃,离心 10min,取上清作为粗体液,置于冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照组织质量(
    g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取
    ② 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。
    2、上机检测:
    酶标仪预热 30min 以上,温度设定 37℃,波长设定为 405nm
    所有试剂解冻至室温(25℃)。
    EP 管中依次加入:
    【注】:若ΔA 过小,可以延长保温时间(如:40min 或更长),或增加样本加样量 V1(如增至 20μL
    则提取液相应减少),则改变后的反应时间 T 和加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1
    4℃保存
    试剂一
    粉体 mg×1
    -20℃保存
    临用前甩几下使试剂粉体落入底部,
    再加 1.5mL 蒸馏水充分溶解备用。
    试剂二
    液体 18mL×1
    4℃保存
    标准品
    粉体 mg×1
    4℃保存
    若重新做标曲,则用到该试剂
    试剂名称(μL
    测定管
    对照管
    样本
    10
    10
    试剂一
    25
    蒸馏水
    25
    提取液
    35
    35
    迅速混匀,37℃保温 30min
    试剂二
    180
    180
    混匀,取 200μL 96 孔板中,于 405nm 处测定吸光
    AΔA=A 测定-A 对照(每个样本需设一个对照管)。本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算:
    1标准曲线方程为 y = 0.063x - 0.0015x 为标准品摩尔质量(nmol),y ΔA
    2、按样本蛋白浓度计算:
    单位的定义:每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmol -硝基*酚定义为一个酶活性单位。
    α-Afa 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0015) ÷0.063]÷(V1×Cpr)÷T
    =52.9×(ΔA+0.0015) ÷Cpr
    3、按样本鲜重计算:
    单位的定义:每克组织每分钟产生 1nmol -硝基*酚定义为一个酶活性单位。
    α-Afa 活性(nmol/min/g 鲜重)= [(ΔA+0.0015) ÷0.063]÷(W×V1÷V)÷T
    =52.9×(ΔA+0.0015)÷W
    V----加入提取液体积,1mL
    V1----加入反应体系中样本体积,0.01mL
    W----样本质量,g
    T----反应时间,30min
    PNP 对分子质量----139.11
    Cpr----样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附:标准曲线制作过程:
    1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
    2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2mg/mL。也可根据
    实际样本来调整标准品浓度。
    3 EP 管加入:10μL 标准品+25μL 蒸馏水+35μL 提取液+180μL 试剂二,混匀,取
    200μL 96 孔板中,于 405nm 下读取吸光值。
    4 根据结果制作标准曲线。

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