- ￥680 - 1280
- KEMOBio
- 进口/国产
- KM1030307
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃
- 保质期：
90天
- 英文名：
pCMV-SPORT6-MAP2K2(cattle)(前100插入和突变2同义突变)
- 库存：
100
- 供应商：
科淼生物
- 规格：
0.5ug/0.5ug
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥1280.0 |
英文名称：pCMV-SPORT6-MAP2K2(cattle)(前100插入和突变2同义突变)
货号：KM1030307
图谱：微客服
宿主：大肠杆菌
用途：基因模板
片段类型：cDNA
片段物种：牛
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光标记：
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文献和实验1. 质粒载体构建不成功（目的片段和载体不能成功连接）的常见原因分析 ①DNA 片段纯度差：体系中的杂质会降低连接效率，如果使用不纯化直接连接的方法一直无法成功构建载体，可以考虑进行纯化后再进行连接； ②目的片段和载体片段使用比例悬殊，或者用量过多或过少：目的片段和载体的摩尔比需要控制在一定范围之内，否则会影响连接效率，具体比例可以草靠连接酶说明书； ③连接条件不当：比如连接时间不足、温度不合适、酶失活等，可以通过设置对照组来排查原因； ④引物设计问题：比如通过无缝克隆的方式进行连接，同源
物转化给寄主细胞，构建质粒载体基因文库，并检测报告基因的表达活性。当插入段同时满足(1)具有基因启动子序列；(2)具有翻译启始区；(3)具有启始密码子；(4)插入方向正确；(5)插入片段3'端编码区序列抗性基因编码区读码框一致，则有可能形成有功能的抗性融合基因，从而启动抗性基因的表达。最早由Rachael等在大肠杆菌中以四环素抗性基因作为报告基因构建了启动子探针质粒pBRH3B，并克隆了一些原核和真核启动子片段。其后Donna等以氯霉素抗性基因作为报告基因，Fodor等以大肠杆菌LacZ为报告
的商业性试剂盒，它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点（MCS）中。2.操作步骤⑴ 连接反应一般在灭菌的0.5ml离心管中进行。⑵ 10μl体积反应体系如下：①取T载体1μl (50ng)，加入等摩尔数PCR 产物 。②加入含ATP的10×Buffer 1μl，T4 DNA连接酶合适单位，用ddH2O 补足至10
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