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-80℃
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90天
- 英文名:
pGEM-3Zf-nAChRA7(human)
- 库存:
100
- 供应商:
科淼生物
- 规格:
0.5ug/0.5ug
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥1280.0 |
英文名称:pGEM-3Zf-nAChRA7(human)
货号:KM1039724
图谱:微客服
宿主:大肠杆菌
用途:基因模板
片段类型:cDNA
片段物种:人
原核抗性:Amp
真核抗性:
荧光标记:
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文献和实验Northern杂交试验指导手册-为制备RNA探针模板的DNA片断亚克隆
A. 载体选择 为了获得能够在体外转录RNA探针的DNA模板,其克隆载体必须带有可供选择的特异转录启动子,同时,为了获得理想的Northern杂交试验结果,载体选择带有两种不同类型而方向相反启动子的载体,以便在RNA探针制备时同时得到两条链的转录探针。 常用的这类载体有:pGEM-3/pGEM-4 ( 2.87kb, SP6/T7 ). pGEM-3Z ( 2.74kb, T7/SP6 ). PGEM-3Zf(-) (3.2kb, T7/SP6 ).
限制性酶切位点。3. ShRNA 插入片段中的茎环应当靠近寡核苷酸的中央。4. 5~6 个 T 必须放置在 ShRNA 插入片段尾部以确保 RNA 聚合酶 III 终止转录。5. 在正义链和反义链序列上不能出现连续 3 个或以上的 T。这可能导致 ShRNA 转录的提前终止。下面以 pSUPER 质粒载体设计 ShRNA 为例:1. 选择双酶切位点分别是 BglII-HindIII site。2. pSUPER ShRNA design model:红色部分包含限制性酶切位点,绿色部分为茎环序列。3. shRNA 的引物
pGEM-3Z ( 2.74kb, T7/SP6 ). PGEM-3Zf(-) (3.2kb, T7/SP6 ). Bluescript M13- (2.96kb, T7/T3 ). 按照试验的经济有效原则,本试验选用 Bluescript M13-。 B. 目的DNA序列与载体 连接 从所建立的cDNA文库中挑选出带有目的DNA片断的克隆,扩增后提取质粒,采用限制性内切酶处理或采用PCR特异扩增的方法分离出目的DNA片断;采用标准
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