- ￥680 - 1280
- KEMOBio
- 进口/国产
- KM101185
- 2025年07月12日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃
- 保质期：
90天
- 英文名：
pPH37
- 库存：
100
- 供应商：
科淼生物
- 规格：
0.5ug/0.5ug
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥1280.0 |
英文名称：pPH37
货号：KM101185
图谱：微客服
宿主：酵母菌
用途：基因敲除
片段类型：ORF
片段物种：酵母
原核抗性：Amp
真核抗性：cytosine
荧光标记：
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文献和实验摘要： 有人提出, 冻存后转化效率降低且这种方法不适合大质粒.以下转贴为coli感受态细胞制备方法,具体方法请最好查阅文献. 摘要: 但有人提出, 冻存后转化效率降低, 且这种方法不适合大质粒.以下为转贴,具体方法请最好查阅文献E.coli 感受态细胞 制备方法：单菌落平板至2ml LB, 37 oC 250 r/m ovn
和EcoRI消化去除OriP片段，T 连接酶连接，构建得到重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBNA1MAR。 质粒纯化和鉴定 所得质粒按质粒纯化试剂盒要求进行抽提纯化。测定光密度值(D260nm )，鉴定质粒的量和纯度，酶切，电泳鉴定。 细胞转染 细胞株COS-7在含10％ 小牛血清的DMEM培养液、5％CO 、37℃ 恒温箱中培养。用阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导质粒pcDNA3-EGFP.EBVR和pcDNA3.EGFP.EBNA1.MAR转染
通过加入基因组 DNA 模板以及设计好的引物进行目的基因的扩增，得到 PCR 产物后进行琼脂糖凝胶电泳验证条带大小，然后通过胶回收，获得纯化目的片段产物。由于加入保护碱基，回收产物需要进行限制性内切酶切从而暴露黏性末端。2. 线性化质粒：将原始的质粒载体，比如 pcDNA3.1 质粒，选择合适的酶切位点，比如 NheI/KpnI 进行酶切，获得线性化的质粒。酶切体系一般选择 50ul，试剂加好之后 37°C 孵育 6~8 小时，或适当延长时间，保证质粒酶切完全。每隔一段时间振荡一下并离心以防液滴蒸发
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