- ￥680 - 1280
- KEMOBio
- 进口/国产
- KM101568
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-80℃
- 保质期：
90天
- 英文名：
pGL4.10[luc2]
- 库存：
100
- 供应商：
科淼生物
- 规格：
0.5ug/0.5ug
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥1280.0 |
英文名称：pGL4.10[luc2]
货号：KM101568
图谱：微客服
宿主：哺乳细胞
用途：荧光素酶报告
片段类型：Promoter
片段物种：空载体
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光标记：Fluc
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文献和实验自杀性质粒载体：一般用于基因突变。将突变的目的基因克隆到自杀性质粒载体上，通过接合等使其进入宿主，由于在宿主菌中不存在复制基因启始所需的复制蛋白（如Pi蛋白等），其无法复制，在外界选择性压力的作用下,自杀性质粒载体所携带的突变基因就与宿主染色体上的野生型发生基因发生二次同源重组，产生了带有突变的突变株；而质粒载体自身由于自杀性特性连同染色体上原有的野生型基因一起随着细菌的传代从菌体内消失。至于一次重组的突变株，可借助质粒上的某些选择基因（如sacB，sucrose敏感）筛除。整合载体：将目的
和EcoRI消化去除OriP片段，T 连接酶连接，构建得到重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBNA1MAR。 质粒纯化和鉴定 所得质粒按质粒纯化试剂盒要求进行抽提纯化。测定光密度值(D260nm )，鉴定质粒的量和纯度，酶切，电泳鉴定。 细胞转染 细胞株COS-7在含10％ 小牛血清的DMEM培养液、5％CO 、37℃ 恒温箱中培养。用阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导质粒pcDNA3-EGFP.EBVR和pcDNA3.EGFP.EBNA1.MAR转染
较合适。太多的载体用量对酶切效率有负面影响，而太少的质粒载体不能保证实验的需要。 2） 然后使用过量2倍以上的酶量进行反应（按照酶切时间一小时计算，酶活性单位的定义可以参见公司的目录，一般一个单位的定义是指推荐条件下消化1微克的lambda DNA所需的酶量），反应时间2小时——过夜（不要超过10小时）。我们实验室一般采用较长的酶切时间，没有遇到过问题，但是也有实验室酶切时间控制较严格。但是原则是质粒载体一定要酶切彻底。 3） 挖胶回收，现在很多的国产试剂盒可以保证50％以上的回收效率。采用
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