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CHO细胞 HCP (宿主蛋白) 残留检测试剂盒

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  • ¥6000
  • 爱必信(absin)
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  • abs590005
  • 上海
  • 2025年07月14日
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      爱必信(上海)生物科技有限公司

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    • 样本

      -

    • 标记物

      -

    • 适应物种

      -

    • 应用

      用于定量检测样本中CHOK1宿主细胞蛋白残留的含量

    • 检测方法

      一步酶联免疫 ELISA 法

    • 检测范围

      -

    • 规格

      96T

    概述  
    描述 CHO(Chinese Hamster Ovary) 宿主细胞分泌的宿主细胞蛋白(Host Cell Protein, HCP) 很可能给生物制品造成污染。若药物研发早期不能充分去除污染物,则可能导致药物疗效降低或引起免疫反应。该试剂盒可高灵敏度地定量检测生物工程制药中宿主细胞蛋白的残留情况,优化工艺流程,确保生物制品的安全性。

    产品参数:
    1、灵敏度 :1ng/mL
    2、检测范围:3-100ng/mL
    3、精密度:批内变异系数≤10%,批间变异系数≤15%
    4、HCP覆盖率:80%以上
    5、特异性:本试剂盒是通用的,因为它可以同 CHOK1 HCP 发生特异反应, 而不依赖于纯化过程
    检验原理 本方法采用一步酶联免疫ELISA法。含有CHOK1 HCP的样品可以与 HRP 标记的山羊抗CHOK1抗体以及包被在酶标板上抗CHOK1抗体同时反应,最终形成一种夹心复合物的固相抗体 -HCP- 标记抗体。通过清洗酶标板可以去除未结合的抗原抗体。向孔中加入 TMB 底物充分反应后,加入终止液后停止显色,用酶标仪读取反应溶液在450/650nm 处的OD或吸光值。OD值或吸光值与溶液中的 HCP 含量成正比。据此可以根据标准曲线计算出溶液中的 HCP 浓度。
    产品组成
    序号 组成 浓度 规格 储存条件
    1 CHOK1 HCP 标准品 0.5mg/mL 70uL/管 ≤-20℃
    2 Anti-CHO HCP-HRP 0.5mg/mL 60uL/管 ≤-20℃,避光
    3 TMB NA 12mL/瓶 2-8℃,避光
    4 20×PBST 0.05% NA 15mL/瓶 2-8℃
    5 终止液 NA 12mL/瓶 室温
    6 酶标板封口膜 NA 3张 室温
    7 BSA NA 1g 2-8℃
    8 高吸附96孔预报酶标板 NA 1块 2-8℃
    用途说明 本试剂盒用于定量检测样本中 CHOK1 宿主细胞蛋白残留的含量。
    使用方法

    一、试剂准备:
    1、PBST 0.05% 15ml 20×PBST 0.05%, 稀释于ddH2O 中,定容至 300ml。
    2、1.0% BSA将瓶中的 1g BSA 溶于 100ml PBST 0.05% 中,充分混匀至完全溶解,2-8℃储存,制备好的稀释缓冲液有效期为 7 天,建议按需配制。
    3、检测液 2μg/mL取48μL 0.5mg/mL Anti-CHO HCP-HRP,稀释于11952μL的1%BSA中,得到终浓度2μg/mL检测液。
    4、QC 和 CHOK1 HCP 标准品的配制。

    管号 原液 浓度(ng/mL) 体积(μL) 1%BSA体积(μL) 总体积 终浓度(ng/mL)
    A 标准品 0.2mg/mL 10 490 500 10000
    B A 10000 50 450 500 1000
    S1 B 1000 50 450 500 100
    S2 S1 100 300 100 400 75
    S3 S2 75 200 175 375 40
    S4 S3 40 150 350 500 12
    S5 S4 12 200 200 400 6
    S6 S5 6 200 200 400 3
    NC NA NA NA 200 200 0
    QC S1 100 50 200 250 20

    二、所需仪器:

    耗材/设备

    厂家 型号

    酶标仪

    Molecular

    Devices

    Spectra Max M5,M5e,或等效设备

    恒温混匀仪

    Eppendorf

    Eppendorf/5355 ,或等效设备

    漩涡混匀仪

    IKA

    MS3 Digital,或等效设备

     

    三、实验流程
    1、 按上述“试剂准备“配制好试剂。
    2、 取 50μL 标准品、样品和 QC 于孔板,然后加入 100μL 检测液 (2μg/mL),用封口膜封住酶标板,将酶标板放置在混匀仪上,500rpm、25±3℃孵育 2 小时。
    3、 倒扣微孔板于水槽,弃去包被液。取300μL 的 PBST0.05%于微孔中清洗酶标板并弃去溶液,重复清洗 3 次。将板子倒扣在干净的纸巾上并拍干。
    4、 每孔加入 100μL TMB 底物,密封酶标板,25±3℃避光孵育 15min。
    5、 每孔加入 100μL 终止液。
    6、 酶标仪 450/650nm 波长处读取吸光度。
    7、 通过 SoftMax 或类似软件分析数据,用四参数拟合回归模型绘制标准曲线。

    产品细节图片1

    注:如果样品中 HCP 的浓度超过标准曲线的上限,则需要在测试前用稀释缓冲液适当稀释。

    性能  
    储存/保存方法

    1、2 组分储存于≤-20℃;5、6 组分储存于室温;3、4、7、8组分储存于 2-8℃。有效期 12 个月。

    注意事项 终止液是 2M 硫酸,请小心处理防止飞溅!

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