安进特外旋冻存管2.0ml（无菌无酶）

正常人胚肺成纤维细胞的培养

实验材料： 1. 肺组织：取自妊娠14—18周的胎儿； 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2； 3. 消化液：0.25%胰蛋白酶（pH7.6—7.8），0.02%EDTA溶液； 4. 培养液：DMEM或RPMI1640，加10%—20%胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml； 5. 保存液：10%二甲亚砜或10%甘油； 6. 眼科剪、眼科镊等无菌消毒手术器械；

【新手必看】类器官培养与分析的详细方法！

/William'sE/UW溶液中，冰上保存以在运输过程中维持组织完整性（图1）。需获得相关机构监管机构（IRB）的适当伦理批准，在采集和储存人类组织前可能需要获得知情同意。 b)组织洗涤：用冰预冷的PBS多次冲洗组织，去除血液和其他污染物。确保无残留血液，因为这可能干扰后续的酶细胞消化。 c)组织切碎：使用无菌手术刀或剪刀将组织精细切碎成小块（如1-2mm）。充分切碎组织但避免损伤细胞。 d)机械解离：使用10mL移液管在试管中反复吹打组织进行机械解离。此步骤可溶解细胞团块，促进单细胞悬液的形成。 e

细胞培养室的设置、设备和准备工作

工作台内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将平皿半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30～35℃预培养48小时，证明无菌后将平板3个，以无菌方式带入超净工作台内左、中、右各放一个；打开平皿盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将平皿盖盖好，置30～35℃培养48小时，取出检查，100级清洁度要求：3个平皿上生长的菌落数平均不得超过1个。超净工作台应定期请有关部门检查其洁净度，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测尘埃粒径≤5祄的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75~1.0m