799264-47-4 1-对甲苯磺酰-1H-苯并[d]咪唑

微管蛋白的可溶性表达及纯化

mM咪唑）悬浮，100ml用5~10ml缓冲液（约当2~5ml每克菌量），视悬浮后的菌液浓度而定；5、反复冻融法破碎细胞：做到14步时由于时间原因不能立即继续后面的操作，可将菌悬液放于-70℃冰箱中冷冻；也可用反复冻融的方法来破碎细胞，在-70℃冻融，在室温下溶解，反复冻融3~4次；6、加Lysozyme至1mg/ml（1ml加10ul），在冰上孵育30min~1h；7、200~300W超声破碎，2s×30次，停顿2s；若菌种较多可以增加破碎次数。注意超声破碎时间，不可太长，否则温度升高易导致蛋白

【原创】真核表达His蛋白，进行天然构象蛋白纯化的心得和疑问。

由于要做酶活性实验，所以选择真核表达His标签蛋白进行非变形的纯化。（避免了原核表达可能得到没功能的蛋白。）先上图上真相：这个说明了：细胞超声裂解后，离心沉淀的碎片里含少量His标签的过表达目的蛋白（第一道），上清里含大量His蛋白（第二道）。之后用特殊的含有镍的树脂小球纯化His蛋白，由于裂解液体积太大了，就分了两次加到柱子里。第一次加进去之后4度孵育1h，然后弃流出液（第三道），第二次把剩下的裂解液加进去，同样4度孵育1h后弃流出液（第四道）然后用漂洗液洗2次柱子里的树脂，使得非特异性黏着

Neuron：解密睡眠的新工具来了！北大李毓龙实验室开发新型组胺 GRAB 探针

、特异、实时检测。  ▲不同核团组胺动态变化动力学在睡眠时相转换过程中存在差异。A, 探针表达和记录示意图。B, HA1h 探针在 PFC 和 POA 的动态变化曲线（图片来源：参考资料 [1]） 组胺神经元向全脑发出广泛投射，那么组胺在不同脑区的动态变化模式是否一致呢？为了解答这个问题，研究作者将 HA1 h 探针表达在小鼠的视前区和前额叶皮层，同时记录了这两个脑区的组胺在睡眠觉醒中的动态变化。 结果显示，两个脑区组胺探针信号大小在相同睡眠时相时是一致的。有趣的是，在 REM 睡眠向觉醒转换