HRP标记-山羊抗人IgG(Fc特异性)(不交叉小鼠IgG)

HRP标记抗体的方法

盐水。 （6）PH7.8饱和硫酸铵溶液及半饱和硫酸铵溶液。 （7）萘氏试剂及聚乙二醇(PEG，MW2000)。 （8）纯化的特异性抗体或抗Ig抗体。 （9）HRP(RZ>3.0)。 （10）Sephadex G-25层析柱(2cm×50cm)。 （11）搅拌器，分光光度计，离心机。 （12）透析袋，大、小烧杯，试管，吸管等。 二、简易过碘酸钠法 本法是以NaIO4先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再与Ig上的氨基相结合，所获酶标记抗体的产率高，将近70%的HRP和Ig结合，99%的Ig

【转帖】HRP标记抗体的方法

酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 　　戊二醛二步法 　　1.　原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。 　　2.　标记步骤： 　　(1)　称取HRP25mg溶于1.25％戊二醛溶液中，于室温静置过夜。 　　(2)　反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制

人免疫球蛋白G Fc 片段(Fcγ)酶联免疫分析（ELISA）

被单抗的微孔中依次加入 免疫球蛋白 G Fc 片段 (Fc γ ) ，再与 HRP 标记的免疫球蛋白 G Fc 片段 (Fc γ ) 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 免疫球蛋白 G Fc 片段 (Fc γ ) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中 人免疫球蛋白 G Fc 片段 (Fc γ ) 含量