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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
5
- 英文名:
AP Oligo Conjugation Kit (Single Label with Amine Oligo)
- 保质期:
1年
- 保存条件:
2-8 °C/-20 °C
CellMosaic 设计了这种 AP-oligo偶联物,其连接体和偶联化学物质保留了 AP 的活性。自 2011 年以来,一些诊断公司已经对具有不同寡核苷酸序列的 AP-寡核苷酸进行了相同的配置和化学测试。
该试剂盒包括纯化的马来酰亚胺活化 AP,由来自小牛肠道的高活性和 EIA 级 AP (>3000 U/mg) 制备而成。用户提供胺改性寡核苷酸,这些寡核苷酸可以从许多商业寡核苷酸供应商处轻松获得。使用试剂盒组件,用户将胺寡核苷酸转化为硫醇寡核苷酸,然后硫醇寡核苷酸与活化的 AP 反应生成 AP-寡核苷酸缀合物。选择亲水性 PEG 连接体来增强水缓冲液的溶解度。Q 柱纯化步骤通常提供纯度高于 95% 的所得 AP-oligo。
该套件提供用于标记一个到三个寡核苷酸样品 的材料。反应规模:2.5 nmol 寡核苷酸。
该 AP-Oligo 偶联试剂盒的主要特点:
提供缀合和纯化步骤,主要提供单标记产品,并且来自游离(未反应)AP 的背景信号最小
高品质活化碱性磷酸酶(>95% 纯度)
快速准备:不到 4 小时的动手时间
偶联和纯化过程中无 AP 活性损失
结合物的质量:>90% 的标记结合物,其中大多数是基于尺寸排阻色谱 (SEC) 的单标记
稳定且长而灵活的基于 PEG 的连接可最大限度地减少 AP 和寡核苷酸之间的相互作用
包括从制备到纯化的所有试剂
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文献和实验性较差和不易提高密度等原因而很少使用。 在点样前,一般先对载体表面进行化学修饰(如多聚赖氨酸或硅烷偶联剂等),使其表面富含氨基并带正电。修饰后的固相载体表面可利用静电吸附带负电的DNA或蛋白质探针,或通过双功能偶联试剂(如戊二醛)辅助形成共价化学键而连接。 玻片表面的修饰方法很多,如3—氨丙基三甲氧基硅烷对玻璃表面进行氨基化,氨基与l,4—苯二异硫氰酸盐发生反应,使玻片表面连接上可以与氨基反应的异硫氰酸基团,5’氨基修饰的寡核苷酸与异硫氰酸基团反应,从而将探针连接在芯片上。Rogers研究
自动化:必须达到人员离机作业,由点样到出报告机器全能完成。 (2)速度快:所有项目应在60min内完成同时具备急诊项目如CK、LD等同工酶及亚型项目。为临床提供及时、准确的诊断信息。 (3)项目齐全:除了血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、CK、LD同工酶等传统项目外必须还能完成尿蛋白、脑脊液蛋白、免疫固定(单克隆抗体)、碱性磷酸酶(ALP)和(g-谷氨酰转肽酶(GGT)同工酶、胆固醇(高密度/极低密度/低密度脂蛋白)、脂蛋白(a)等最新检验项目。 (4)敏感度高:必须采用敏感
的特异性而灵敏度一般的试验,如Southern 印迹、Northern 印迹、斑点印迹及菌落P噬菌斑杂交实验。 1. 2. 2 5' 末端标记法 5' 末端标记法是通过化学方法将地高辛标记于寡核苷酸的5' 末端。首先在5' 末端连接上一个氨基连接臂残基,将合成的寡核苷酸纯化后,再使DIG-NHS 与5' 末端的氨基残基发生共价结合,从而形成标记探针。这类探针的一个主要优点是其3' 端在DNA 合成反应中充当引物,使反应产物得以标记。
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