人生长因子受体结合蛋白14(Grb14)重组蛋白

天然蛋白质关键参数有哪些？
IPTG浓度
有可能，宿主中的蛋白表达将通过lac操纵子系统操作。这个系统的详细解释可以在别处找到，你加入异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG），一种乳糖类似物，控制蛋白的表达。蛋白的表达应处于生长的对数期，即当溶液的波长600（OD 600）处的光密度达到0.4-0.6。 如果你的目标是可溶性蛋白质，最好不要改变细胞中蛋白的折叠功能。已经假定不溶性蛋白可能是由于分子伴侣的存在。因此，使用高浓度的IPTG（> 1mM）可能不总是产生的结果。尝试几个不同的浓度，看看哪一个给你最高的可溶性蛋白的产量。
温度
偶尔，你可以在37°C的典型温度下，通过生长和诱导分离可溶性形式的蛋白质，但通常情况下，溶解度在较低温度下增强。可尝试在30°C，25°C和18°C下进行诱导。 注意：如果首先在37℃生长，先让培养物冷却到诱导温度，再加入IPTG。
诱导时间
更长并不总是更好。对于对宿主有毒的蛋白尤其如此。在诱导期间，每隔几个小时取样，并检查目的蛋白的表达。典型的诱导时间根据温度而变化：对于37℃，尝试4小时;对于30℃，进行5-6小时，并且任何低于25℃的温度应该允许生长过夜。

产品名称	人生长因子受体结合蛋白14(Grb14)重组蛋白
货号	LZ-D7156
规格	10µg50µg 200µg 1mg 5mg
物种	Homo sapiens (Human，人)

英文名称：Recombinant Growth Factor Receptor Bound Protein 14 (Grb14)
英文别名：GRB14 adapter protein
物种：Homo sapiens (Human，人)

来源：原核表达
宿主：E.coli
内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)
亚细胞定位：细胞质, 高尔基体
预测分子量：30.9kDa
实际分子量：30kDa(差异分析请参阅说明书)
片段与标签：Ala300~Leu540 with N-terminal His Tag
缓冲液成份：PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose.

性状：冻干粉
纯度：> 90%
等电点：9.0
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格:10µg50µg 200µg 1mg 5mg




重组蛋白表达体系分析：
（一）原核表达系统
原核表达系统有大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统。其中最常用的表达系统主要是大肠杆菌表达系统。卡梅德生物通过每年多达400个原核蛋白制备项目的技术积累拥有一套完整的蛋白表达和纯化方案，为客户提供优质服务。
（二）酵母表达系统
酵母是一种真核微生物，其细胞有表达外源蛋白的能力，可以达到一个相当高的胞密度状态，在酵母中表达外源蛋白可以进行翻译后修饰，如磷酸化和糖基化。由于酵母宿主细胞结合了细菌和高阶生物宿主细胞表达系统的优良特性，当外源蛋白未能成功地在大肠杆菌中表达时，它是一个不错的选择。用于外源蛋白表达的酵母菌株包括酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、毕赤酵母和乳酸克鲁维酵母。卡梅德生物拥有丰富的酵母蛋白重组表达、发酵和纯化经验，能够快速为不同客户定制酵母表达策略。
（三）昆虫细胞表达系统
膜蛋白、大分子质量蛋白和蛋白激酶这些很难用细菌表达系统表达的蛋白，在Sf9或High-5等昆虫细胞中实现了表达。在大多数昆虫细胞表达系统中，外源基因通过杆状病毒载体转染宿主细胞，含有目标基因的标记盒通过同源重组并入宿主基因组中。卡梅德生物可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品，免费对客户提供的基因进行序列分析，据Sf9，Sf21，Hi-5及S2昆虫细胞的密码子偏爱性，免费为您进行密码子优化，从而有效提高重组蛋白表达量。
（四）哺乳动物细胞表达系统
当含有复杂二硫键或翻译后修饰的靶蛋白不能使用其他表达系统表达时，哺乳动物细胞可表达外源蛋白。常用的外源蛋白表达的哺乳动物细胞系包括海拉（Hela）细胞、人胚肾细胞（HEK293）和中国仓鼠卵巢细胞（CHO）。卡梅德生物建立了完善的哺乳表达体系，包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等细胞系，配合卡梅德设计的高表达载体（含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列），能够为客户提供更高表达水平的重组蛋白哺乳动物细胞表达与制备。
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