- ￥1890
- Sino Biological
- 北京
- HG11777-CF
- 2025年08月12日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃ to -80℃
- 保质期：
12个月
- 英文名：
人 RPS6KA1 表达质粒,C-Flag
- 库存：
99
- 供应商：
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格：
1 Unit
基因靶点：RPS6KA1
反应种属：Human
应用说明：见说明书
GeneBank ID：NM_002953.3
序列长度：2247
载体：pCMV3-C-FLAG
cDNA描述：Full length Clone DNA of Human ribosomal protein S6 kinase A1
标签序列：FLAG Tag Sequence: GATTACAAGGATGACGACGATAAG
酶切位点：KpnI + XbaI(6kb+2.25kb)
质粒：pCMV3-RPS6KA1-Flag
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文献和实验酶 蛋白酶表达质粒 Amp PBV220载体，42℃表达，His 纯化，蛋白酶切 ULP酶 蛋白酶表达质粒 Amp PET22b载体，25℃，0.5mM IPTG，4h表达，His纯化，蛋白酶切 HRV 3c酶(pp酶) 蛋白酶表达质粒 PET载体，30℃
会怎样"用 CRISPRa。 --- 一、机制差异决定了两者能回答的问题不同 过表达质粒（cDNA / ORF） 外源启动子（CMV、EF1α 等）驱动，表达量与内源调控完全脱钩； 通常只包含单一 CDS，不含内含子和 UTR； 表达量可达到内源的几十到几百倍； 可携带标签（FLAG、HA、GFP）方便检测。 CRISPRa（dCas9-VP64 / VPR / SAM / SunTag） 失活 Cas9（dCas9）融合转录激活域，被 gRNA 引导至靶基因启动子区； 激活的是内源位点，转录本包含完整的内含
标签（如 Flag）、抗性基因、WPRE 等元件，注意慢病毒包装容量约 4kb； 病毒包装：包装质粒与工具载体共转染 293T 细胞，收获上清，浓缩纯化； MOI 预实验：用对照病毒摸索最佳感染剂量（一般以感染后 70~80% 细胞存活且效率达标为准）； 感染目的细胞：感染后 48~72h 观察荧光或开始加药； 抗生素筛选：puromycin 等筛选至少 48h，空细胞对照全部死亡、实验组存活即为阳性细胞； 验证：qPCR / Western Blot 确认表达或敲低效果； 单克隆分选（可选）：有限稀释或流式
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