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- 武汉
- 2025年11月04日
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武汉
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傲星生物科技有限公司
细胞划痕实验是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。
实验流程
细胞板画线→接种细胞→用枪头制造划痕→培养适当时间进行拍照注意事项
| 1.流式检测样本 | |||
| 样本形式 | 处理方式 | ||
| 血样 | 当天采集的血液，置于抗凝管中，建议血量≥2mL，单个血样对应分组较多时应适当加大采血量 | 4小时之内完成淋巴细胞分离 | |
| 组织 | 新鲜标本离体后置于PBS中，4℃保存运输。离体时间不可超过24小时。 | ||
| 细胞 | 武汉本地客户可以将培养细胞的孔板交予销售带至实验室，需要用封口膜密封，防止漏液。外地客户需将有活力的细胞置于培养瓶中常温快递至公司检测 | ||
| 注意事项： 1.流式细胞样本量≥106个细胞，周期检测样本量≥107个细胞 2.血液≥2ml |
|||
| 2.其他检测 | |||
| 检测形式 | 处理方式 | 保存 | 运输 |
| 流式细胞周期检测 | 将细胞正常消化后，冷PBS悬浮细胞，之后缓慢加入4℃预冷无水乙醇固定，乙醇终浓度75% | -20℃ | 冰袋 |
| 流式细胞凋亡检测 | 将细胞正常消化后，PBS洗一遍，PBS重悬 | 必须当天送样 | 冰袋 |
| Tunel细胞凋亡检测 | 有活力的细胞，弃去培养液，PBS冲洗后，加入足量固体液，培养板附上保鲜膜，盖上板盖，胶布缠裹固定，避免固定液体流出 | 4℃ | 冰袋 |
| 原代分离实验 | 无菌采取完整的组织块，新鲜组织离体后置于无菌培养基中 | 离体时间不可超过4小时 | 冰袋 |
| 血小板的分离 | 需要选择医用真空采血管获得抗凝血，全过程样本均需在20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取血2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。 | 4℃ | 冰袋 |
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文献和实验细胞划痕实验是一种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。划痕实验大家会做，那么如何将这一大批的图片进行实验距离的测定呢？Image J 又要派上用场了，它不仅可以用于分析 DNA 电泳 WB 条带的灰度值、细胞计数、细胞共定位，就连细胞划痕面积一样可以计算！一、划痕实验的实验原理和步骤先简单的回顾下划痕实验的实验原理和实验步骤。1. 实验原理细胞划痕法是测定肿瘤细胞的运动特性的方法之一，是在体外培养的单层细胞上划痕致伤，观察肿瘤细胞的迁移
材料： 6孔板 marker笔 直尺 20微升枪头（灭菌） 无血清培养基 PBS 准备： 所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内） 流程： 1、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2、在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满
材料： 6孔板 marker笔 直尺 20微升枪头（灭菌） 无血清培养基 PBS 准备： 所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内） 流程： 1、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2、在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。 3、第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头
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