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- 日本
- 2025年12月24日
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- 技术资料
- 供应商：
日本IBL
- 库存：
一盒
- 样本：
人EDTA-血浆和细胞上清液
- 标记物：
HRP
- 适应物种：
人
- 应用：
定量检测人EDTA-血浆和细胞上清液中的纤维蛋白-5/DANCE
- 检测方法：
ELISA（酶免法）
- 检测范围：
0.08ng/m/L
- 规格：
96人份
通用名称：人纤维蛋白-5/DANCE检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Human Fibulin-5/DANCE Assay Kit
【规格】
96T
【预期用途】
本试剂盒可用于定量检测人EDTA-血浆和细胞上清液中的纤维蛋白-5/DANCE。本产品仅用于科研，不用于诊断。
【前言简介】
DANCE被鉴定为在胚胎发生过程中主要表达于动脉的整合素配体，被命名为发育动脉和神经嵴EGF-like/DANCE。它也被称为纤维蛋白-5，是纤维蛋白家族的一个成员，纤维蛋白-5/DANCE是一种含有448个氨基酸和66kDa的分泌蛋白。它在N端断裂子中包含一个RGD（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）基序，并与整合素α5β1、αvβ3和αvβ5结合。mRNA在平滑肌细胞、成纤维细胞和内皮细胞中的表达增强。纤维蛋白-5缺陷的小鼠再现了人类的衰老表型，如皮肤松弛（皮肤松弛）、肺气肿性肺和物质僵硬。众所周知，弹性纤维的破坏和降解直接导致许多与衰老相关的疾病。在纤维蛋白-5缺陷的小鼠中观察到无序的弹性纤维，这表明纤维蛋白-5/DANCE是弹性生成的必要蛋白。该产品是一种ELISA试剂盒，可以测量人的纤维蛋白-5/DANCE。
【检测原理】
本试剂盒是一种利用两种高特异性性抗体的固相夹心ELISA（酶联免疫吸附试验），四甲基联-苯-胺（TMB）被用作显色剂，颜色的强度与样本中纤维蛋白-5/DANCE的量成正比。
【试剂盒组分】
- 微孔板： 96孔（抗DANCE小鼠IgG单克隆抗体亲和纯化）
- 标记抗体： 30倍浓缩，1x0.4ml（HRP偶联的抗DANCE小鼠IgG 单克隆抗体Fab’亲和纯化）
- 标准品： 2x0.5ml（重组人DANCE）
- EIA缓冲液： 1x30ml
- 标记抗体溶液： 1x12ml
- 底物液： 1x15ml
- 终止液： 1x12ml
- 洗涤缓冲液（浓缩）： 1x50ml
试剂盒应储存于2-8℃下，其有效期在试剂盒上注明，不要使用过期试剂。
【试剂制备】
（1）洗涤缓冲液
使用前需平衡至室温并混合均匀，用去离子水40倍稀释洗涤缓冲液浓缩物，例如，
50mL洗涤缓冲液浓缩物+1950mL去离子水，混合均匀；稀释后的洗涤缓冲液可在冰箱中储存2周
（2）标记抗体
在收集容器中用标记抗体稀释液30倍稀释标记抗体，例如，
若使用1条微孔板（8孔），则需要800μL标记抗体，即30μL标记抗体浓缩物+870μL标记抗原溶液，混合均匀，仅在使用前进行配制
剩余的标记抗体浓缩物应密封储存在4℃下
（3）标准品
向标准品中加入0.5mL去离子水使其完全溶解，标准品的浓度为10ng/mL。
准备8支试管并向每个试管中加入230μL EIA缓冲液用于稀释标准品
（4）样品
血浆样本必须用EIA缓冲液进行稀释，建议稀释200倍，若样本吸光度超过检测范围，则需进一步稀释
【检测步骤】
- 确定试剂空白孔，并将100μL EIA缓冲液加入该孔中
- 确定样本空白孔，并将100μL试管8溶液加入该孔中
- 将100μL标准品和样本加入相应的孔中
- 封板，在37℃下孵育60分钟
- 弃去孔中内容物，每孔加入超过350μL洗涤缓冲液洗板4次，结束后在吸水纸上拍打微孔板以除去残留液体
- 将100μL标记抗体加入每个孔中，除了试剂空白孔
- 封板，在4℃下孵育30分钟
- 弃去孔中内容物，每孔加入超过350μL洗涤缓冲液洗板5次，结束后在吸水纸上拍打微孔板以除去残留液体
- 将100μL底物液加入每个孔中
- 在室温下避光孵育30分钟
- 将100μL终止液加入每个孔中
- 加入终止液后30分钟内测量450nm处的吸光度
【计算结果】
建立标准曲线前，从所有数据中减去样本空白的吸光度，包括标准品和未知样本，根据样本浓度和吸光度在对数纸上建立最佳拟合标准曲线，未知样本的浓度可直接从标准曲线上读取
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文献和实验人纤维蛋白原(Fibrinogen)ELISA试剂盒 说明书
人纤维蛋白原 ( Fibrinogen )ELISA 试剂盒 ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和生物体液内 ) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 Fibrinogen 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Fibrinogen与单抗结合，加入生物素化的抗人 Fibrinogen ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合
、试剂 1.蒸馏水：使用重蒸水比用去离子水好，蒸馏水的PH为6.0-7.0.水质不能有混浊，应无菌，无Ca2+、无致热源。 2.有保护剂、抗生素、抗体或其它添加剂的水不能用于溶剂试剂。 3.复溶后的试剂，不用时应加盖子，储存在2-8℃，APTT和FIB均不要冷冻保存。冬天运输时，注意防冻。 4.稀释倍数要准确，并标明复溶或开瓶时间。复溶后在冰箱中贮存时间不能过长，国产试剂最长7天，复溶试剂需用几天的，不应在预温槽中放置时间过长，最好取出部分试剂，剩余即放回冰箱内冷藏
酶，糜蛋白酶、凝血因子和纤溶活性，能精确测定纤维蛋白原，但会引起凝血酶时间的延长。 五、试剂 1.蒸馏水：使用重蒸水比用去离子水好，蒸馏水的PH为6.0-7.0.水质不能有混浊，应无菌，无Ca2+、无致热源。 2.有保护剂、抗生素、抗体或其它添加剂的水不能用于溶剂试剂。 3.复溶后的试剂，不用时应加盖子，储存在2-8℃，APTT和FIB均不要冷冻保存。冬天运输时，注意防冻。 4.稀释倍数要准确，并标明复溶或开瓶时间。复溶后在冰箱中贮存时间不能过长
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