甲型流感（禽流感）病毒H3亚型 RT-PCR试剂盒

甲型流感(禽流感)病毒H3亚型RT-PCR试剂盒
产品及特点：
甲型流感病毒(Influenza A virus)为常见流感病毒，甲型流感病毒最容易发生变异，甲型流感病毒的亚型则被人们称为“禽流感”，禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性传染病，病毒基因变异后能够感染人类，感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重的肺炎，严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡，病死率很高。此病可通过消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等多种途径传播，人员和车辆往来是传播本病的重要因素。本产品根据 PCR 原理开发，可用于科研领域快速检测甲型流感(禽流感)病毒 H3 亚型。
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据甲型流感(禽流感)病毒H3亚型的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL(橘黄盖)
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL(红盖)
试剂三	超纯水	1 mL(亮黄盖)
试剂四	甲型流感(禽流感)病毒H3亚型 RT-PCR 引物混合液	100 μL(白盖)
试剂五	甲型流感(禽流感)病毒H3亚型 RT-PCR 阳性对照(1×10E8 /μL)	50 μL(黄盖)
试剂六	使用手册	1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。 
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂：
样品 RNA。
甲型流感(禽流感)病毒H3亚型RT-PCR试剂盒
使用方法：
一、样品 DNA 的制备： 
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 甲型流感(禽流感)病毒H3亚型 PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置RT-PCR反应(20 μL 体系)： 
3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份	N+2 个 样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×双酶一管式RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
甲型流感(禽流感)病毒H3亚型 RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2μL	2μL
N+2 个制备的 RNA 样品	各12.5μL	--	--
超纯水	--	12.5μL	--
甲型流感(禽流感)病毒H3亚型RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液	--	--	12.5μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4.上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR反应35个循环	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测： 
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
所有产品仅供科研使用，不得用于其他用途。