- ￥660
- wksubio
- WS7011F
- 国内
- 2025年08月29日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Ornithine aminotransferase (OAT) kit
- CAS号：
WS7011F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
鸟氨酸转氨酶（OAT）测定试剂盒说明书
（货号：WS7011F 分光法 48 样）
一、产品简介：
鸟氨酸转氨酶（OAT，EC 2.6.1.13）是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸的关键酶, 对植物
适应逆境胁迫起关键作用
鸟氨酸转氨酶（OAT）在底物鸟氨酸和α-酮戊二酸存在下，使鸟氨酸脱氨并伴随着
NADH 的氧化，通过检测 NADH 在 340nm 处吸光值的下降量，即可计算得出鸟氨酸转
氨酶的酶活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、水浴锅、离心机、可调式移液器、研
钵、冰和蒸馏水。
四、鸟氨酸转氨酶（OAT）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、 样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清液待用。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量(104)：提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。
③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则离心后取上清检测。
2、 上机检测：
1 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温。
③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
60
试剂一
30
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×3 支
4℃保存
临用前甩几下，使粉体落到底部，
再加入 0.75mL 蒸馏水溶解备用，用
不完的试剂分装后-20℃保存，禁
反复冻融，三天内用完。
试剂二
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前甩几下，使粉体落到底部，
再加入 5mL 蒸馏水溶解备用
试剂三
液体 28mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前甩几下，使粉体落到底部，
再加入 5mL 蒸馏水溶解备用本试剂盒仅供科研使用
2
试剂二
60
试剂三
490
室温（25℃）放置 5min
试剂四
60
混匀，立即于 340nm 处检测，10s 时读取
A1，15min 后读取 A2，△A= A1-A2。
【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 30min 后或更长读取 A2，改变后的反应时
间需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体积需代入计算公式
重新计算。
2. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会偏
高），可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于检测；
3. 若下降趋势不稳定，可以每隔 20S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与
计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
OAT 活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T=125.1×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
OAT 活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=125.1×ΔA÷W
3、按细菌/细胞数量计算：
单位定义：每 104个细胞每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位（U）。
OAT 活力(nmoL/min/104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.25×ΔA
4、液体中 OAT 活力的计算:
单位定义：每毫升液体每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
OAT 活力(nmol/min/mL)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷V1÷T=125.1×ΔA
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.06mL；
V2---反应体系总体积，7×10-4 L；
d---光径，1cm；
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
W---样本质量，g；
500---细菌或细胞数量；
T---反应时间，15min；
Cpr---蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。
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