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鸟氨酸转氨酶(OAT)试剂盒,微板法

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  • wksubio
  • WS7011W
  • 国内
  • 2025年08月29日
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    • 英文名

      Ornithine aminotransferase (OAT) kit

    • CAS号

      WS7011W

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    鸟氨酸转氨酶(OAT)测定试剂盒说明书
    (货号:WS7011W 微板法 96 样)
    一、产品简介:
    鸟氨酸转氨酶(OATEC 2.6.1.13)是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸的关键酶, 对植物
    适应逆境胁迫起关键作用
    鸟氨酸转氨酶(OAT)在底物鸟氨酸和α-酮戊二酸存在下,使鸟氨酸脱氨并伴随着
    NADH 的氧化,通过检测 NADH 340nm 处吸光值的下降量,即可计算得出鸟氨酸转
    氨酶的酶活性大小。
    二、试剂盒组成和配制:
    三、所需的仪器和用品:
    酶标仪、96 孔板、水浴锅、离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、鸟氨酸转氨酶(OAT)活性测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
    1、 样本制备:
    ① 组织样本:
    取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆,12000rpm4℃离心 10min,取上清液待用。
    【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取
    ② 细菌/细胞样本:
    先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
    提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
    12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。
    ③ 液体样本:澄清的液体样本直接检测,若浑浊则离心后取上清检测。
    2、 上机检测:
    ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm
    ② 所有试剂解冻至室温。
    ③ 在 96 孔板依次加入:
    试剂名称(μL
    测定管
    样本
    20
    试剂一
    10
    试剂二
    20
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1
    4℃保存
    试剂一
    粉体 mg×3
    4℃保存
    临用前甩几下,使粉体落到底部,
    再加入 0.5mL 蒸馏水溶解备用,用
    不完的试剂分装后-20℃保存,禁
    反复冻融,三天内用完。
    试剂二
    粉体 mg×1
    4℃保存
    临用前甩几下,使粉体落到底部,
    再加入 5mL 蒸馏水溶解备用
    试剂三
    液体 14mL×1
    4℃保存
    试剂四
    粉体 mg×1
    4℃保存
    临用前甩几下,使粉体落到底部,
    再加入 5mL 蒸馏水溶解备用本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂三
    130
    室温(25℃)放置 5min
    试剂四
    20
    混匀,立即于 340nm 处检测,10s 时读取
    A115min 后读取 A2,△A= A1-A2
    【注】1.若A 的值在零附近,可以适当延长反应时间到 30min 后或更长读取 A2,改变后的反应时
    间需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量,则改变后的加样体积需代入计算公式
    重新计算。
    2. 若起始值 A1 太大如超过 2(如颜色较深的植物叶片,一般色素较高,则起始值相对会偏
    高),可以适当减少样本加样量,则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 12000rpm, 4℃离心 10min,上清液用于检测;
    3. 若下降趋势不稳定,可以每隔 20S 读取一次吸光值,选取一段线性下降的时间段来参与
    计算,相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    五、结果计算:
    1、按样本蛋白浓度计算:
    单位定义:每毫克组织蛋白每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
    OAT 活力(nmol/min/mg prot=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(V1×Cpr) ÷T
    =214.4×ΔA÷Cpr
    2、按样本鲜重计算:
    单位定义:每克组织每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
    OAT 活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(W×V1÷V)÷T
    =214.4×ΔA÷W
    3、按细菌/细胞数量计算:
    单位定义:每 104个细胞每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位(U)。
    OAT 活力(nmoL/min/104 cell)= [ΔA×V2÷ε×d×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.43×ΔA
    4、液体中 OAT 活力的计算:
    单位定义:每毫升液体每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
    OAT 活力(nmol/min/mL)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷V1÷T
    =214.4×ΔA
    V---加入提取液体积,1 mL
    V1---加入样本体积,0.02mL
    V2---反应体系总体积,2×10-4 L
    d---96 孔板光径,0.5cm
    ε---NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm
    W---样本质量,g
    500---细菌或细胞数量;
    T---反应时间,15min
    Cpr---蛋白浓度(mg/mL),建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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