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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
PAGE Gel Rapid Preparation Kit (10%)
- 库存:
10
- 供应商:
上海毕合生物化学技术有限公司
- 规格:
10 gels
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文献和实验一. 实验原理SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后,电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。二. 试剂和器材试剂:1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH
完整蛋白质从 SDS-PAGE 胶中的电洗脱及其 MALDI-TOF MS 分析
1. 前言 基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 已经被广泛应用于生 物科学中。结合十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE ) 和酶解消化,它提供了一种通过肽质量指纹谱(PMF ) 的快速、灵敏和准确鉴定蛋白质的方法通常 PMF 给出 10%~40% 的序列覆盖率。这样的覆盖率对于蛋白质鉴定来说已经足够,但它可能还不足以用来区分高度相似的蛋白质异构体。蛋白质异构体/同工酶广泛存在,它们通过 mRNA 的可变剪切或多基因家族生成。虽然它们在细胞中催化
乙醇、水洗涤干净,然后使其自然风干或烘干。2)试样格(梳子)临用前用无水乙醇擦拭,让其挥发至干。3)灭菌枪头、eppendorf管。2、制备凝胶1)安装玻璃板、板条,并将玻璃板固定在电泳槽中,以5%琼脂封底。2)配制10%的分离胶(20ml):依次将8ml蒸馏水,6.7ml 30%丙烯酰胺贮存液,5ml 1.5mol/L Tris(pH8.8)溶液,0.2ml 10% SDS溶液,0.2ml 10%过硫酸铵,0.008mlTEMED混合,立即灌胶。3)迅速在两玻璃板间隙中灌注分离胶,直至剩余的板宽比
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