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- 2025年10月24日
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深圳子科生物
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文献和实验相关专题 SDS-Page 凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。 1. 分离胶(12%) 配制 所需试剂 所需体积 分离胶(12％)
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量（垂直板型电泳）（图）
模板。为防止渗漏，可在上、下电极槽中加入蒸馏水，但不能超过短板，以防凝胶被稀释，约30min，凝胶聚合，继续放置20～30min后，倒去上、下电极槽中的蒸馏水，小心拔出梳形样品槽模板，用窄条滤纸吸去残余水分，注意不要弄破凹形加样槽的底面。倒入电极缓冲液即可进行预电泳或准备加样。（三）样品的处理与加样 1、样品的处理 根据分子量标准蛋白试剂盒的要求加样品溶解液，如上海东风生化试剂厂生产的低分子量标准蛋白试剂盒，每一安瓿则需加入200μL样品溶解液，自己配制标准及未知样品，按0.5～1mg/1ml
2. 电泳(Electrophoresis)： (1) SDS-PAGE凝胶配制(参考一些文献资料进行配制) (2) 样品处理 在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。 (3) 上样与电泳 冷却到室温后，把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。为了便于观察电泳效果和转膜效果，以及判断蛋白分子量大小。 为了电泳方便起见，也可以采用整个SDS-PAGE
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