单细胞悬液制备

肿瘤组织单细胞悬液的制备方法
单细胞悬液制备已经广泛应用于生物、医药等科研领域。在细胞学分析、医学诊断、细胞疗法领域有广泛应用。可用于流式细胞术、单细胞测序、原代细胞的分离。
实验材料：
肿瘤组织消化液(终浓度为0.1% 的胶原酶,0.01% 透明质酸酶,0.002% 的DNA 酶)
实验步骤:
取手术切除的新鲜肿瘤组织, 无菌生理盐水冲洗干净, 剪成1mm 3 大小的碎块, 加入肿瘤组织消化液, 37 ℃消化2 小时, 100 目尼龙网过滤, 500 r/m in 离心10 m in, 弃上清, 加入适量Hanks 液, 混匀后行不连续密度梯度离心, 2000 r/min 20 min, 收集富含肿瘤细胞的悬液, 洗涤2 次后, 用含10 % 血清的1640 培养液调整细胞数至实验备用。
实验注意事项：
纤维化重的如：乳腺癌，肺癌、胃肠癌肿瘤的消化用胶原酶3，浓度100-150u/L,消化3-4小时，其间要吹打。过滤是用300目尼龙膜好。纤维化低的如：肝癌、卵巢癌的消化用透明质酸酶或者胰酶等，时间与浓度有关，参考使用说明书。