细胞冻存盒，适配30 × 1ml或2ml冷冻管

小鼠脑神经瘤细胞概述及培养方法！

1-2mL 培养液后吹匀。 4、将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。 注：第一次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面 T25 瓶为例 1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 2ml 完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2、1000RPM 离心 5 分钟去掉上清。用血清重悬浮，加 DMSO

类器官培养与应用——结直肠类器官

清洗后，再次 4℃ 条件下 300g 离心 5min。 17、将所得沉淀按照 1:3-1:5 的比例重复 10-13 步骤（具体比例通过类器官的汇合度确定），完成传代。   类器官冻存 18、取 1-2 个孔的类器官，消化离心后取细胞沉淀，加入 1ml 细胞冻存液。 19、将细胞重悬后转移至冻存管中，利用程序降温盒缓慢降温至 -80℃。 20、第二天，将样品转移到液氮中长期储存。   类器官复苏 21、将液氮冻存的 CRC 类器官放置在 37℃ 水浴锅中进行解冻，水浴时间不宜超过 2min。 22

做细胞冻存的人都经历过这些致命败笔！你逃过了吗？

在园子里经常看到询问冻存、复苏细胞的方法和注意事项。故介绍一些致命的 “败笔”，和解决方法。 希望对大家有帮助。 （ 以 Raji 为例） 一、细胞冻存： 1. 错误的时机： 细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已 经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。 解决： 最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内。 2. 细胞太少： 冻存时细胞浓度低于 1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）。 解决： 离心后调整细胞