- ￥4400
- 南京万木春
- 进口/国产
- 23XR205
- 2026年01月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
/
- 库存：
现货库存
- 供应商：
南京万木春
- 肿瘤类型：
/
- 细胞类型：
原代细胞
- 品系：
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- 组织来源：
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- 相关疾病：
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- 物种来源：
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- 免疫类型：
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- 细胞形态：
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- 是否是肿瘤细胞：
否
- 器官来源：
/
- 运输方式：
常温/干冰
- 年限：
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- 生长状态：
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- 规格：
5×10^5/T25方瓶
冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部，分左右两支，行于心脏表面。冠状微血管内皮细胞对于心肌细胞的功能同时具有生理和病理的效应。它通过分泌NO、内皮素-1、前列腺素、腺苷酸嘌呤、利钠肽以及其它的物质以调节心肌细胞的功能，同时表达炎症相关的黏附分子，代谢相关的酶、细胞外基质、信号转导、细胞骨架等分子。
本公司生产的大鼠冠状微血管内皮细胞采用体外灌注酶解法制备而来，细胞总量约为5×105/T25方瓶，vWF、Factor VIII免疫荧光染色呈阳性，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法
1 、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中静置 2-3 小时， 以稳定细胞状态，然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的完全培养液（备注： 先使用瓶子中完全培养液培养及尽快冻存保种细胞， 保存种子后再尝试自己完全培养液培养观察是否适合此细胞生长，以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡） ，最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。
2 、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液， 用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本完全脱落后加入完全培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 10ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后， 观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3 、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本完全脱落后加入完全培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）用适当量的冻存液（完全培养液： FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期储存（或者按照梯度程序降温模式直接放置-80 度冻存后并转移液氮中长期储存）。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞转移至含 5ml 完全培养液无菌离心管中，1000rpm 离心 5min ，然后加入 5ml 完全培养液混匀细胞， 将细胞悬液转移至 T25 培养瓶中， 放置于 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中培养；
3）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
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文献和实验的[5]，但细胞得率均较低，而近些年来国外大多数方法采用以大脑皮质为材料、酶消化及梯度离心分离脑微血管段并进行原代培养[6~9,11,12]。由于原代培养中无法避免地混杂成纤维细胞、周细胞、平滑肌细胞、星型胶质细胞等其他细胞的生长，而且工作量大、过程繁琐且费用高[1]，进行较纯的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养一直是国内外的一个难点。 本人参照文献[6]、[7]、[8]的方法，成功地摸索出大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法，并获得纯度较高的脑微血管内皮细胞。 1.材料与方法 1.1 实验动物 每次
抗人CD105单克隆抗体（NeoMarkers），兔抗人CD34、CD31多克隆抗体（Antibody Diagnostica Inc），兔抗人vW因子多克隆抗体（华美公司），抗兔及抗鼠ABC试剂盒、DAB显色试剂盒为华美公司产品，其他试剂均为国产分析纯以上级别。 3、方法: 植块法原代细胞培养： 细胞培养瓶的处理：选用50ml玻璃培养瓶，高压蒸汽灭菌，瓶底铺自制鼠尾胶（制作方法参见2），移入80℃烤箱烤干，临用前用消毒D-Hanks平衡盐缓冲液冲洗3次
原代微血管内皮 细 胞（ Primary Microvascular Endothelial Cells ）的体外分离培养 微血管内皮细胞生长因子的应用和免疫磁珠技术的发展，使微血管内皮细胞的培养和纯化变得相对简化。 1、微血管内皮细胞培养简述人体主要器官和组织的微血管内皮细胞已经培养成功的有：骨骼肌、心、脑、胃、视网膜、肺、皮肤、脉络膜、小肠、脂肪、肝窦、肾、关节滑膜、胎盘、骨髓、胰岛、角膜及食道等器官组织的微血管内皮细胞。 2、微血管内皮细胞的分离目前分离内皮细胞的方法主要有三种
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