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脯氨酸脱氢酶(ProDH)试剂盒,微板法

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  • ￥860
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  • WS1011W
  • 国内
  • 2025年07月28日
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    • 英文名：

      Proline Dehydrogenase (ProDH) Kit

    • CAS号：

      WS1011W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    脯氨酸脱氢酶（PDH）试剂盒说明书
    （货号：WS1011W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    脯氨酸脱氢酶(proline dehydragenase，PDH，EC 1.5.1.2) 催化脯氨酸生成 Δ1-二氢*咯-
    5-羧酸的反应，是脯氨酸降解过程的限速步骤。脯氨酸是分布最广泛的一种渗透物质，在胁
    迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯氨酸，降低 PDH 活性
    对于防止渗透胁迫对植物造成伤害、保护细胞结构等方面具有重要意义。
    脯氨酸脱氢酶(PDH)催化脯氨酸脱氢并使 NAD+还原成 NADH，通过检测 NADH 在340nm
    处的增加速率即可得出 PDH 酶活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉体 mg×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下，使粉体落到底部，
    再加入 1.1mL 蒸馏水溶解备用
    试剂二
    液体 15mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂三
    粉体 mg×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下，使粉体落到底部，
    再加入 1.1mL 蒸馏水溶解备用
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、脯氨酸脱氢酶（PDH）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    称取约 0.1g 组织样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，
    取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    1
    酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
    2 所有试剂解冻至室温（25℃）。
    3
    在 96 孔板中依次加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    40
    试剂一
    10
    试剂二
    140
    试剂三
    10
    轻轻混匀，室温（25℃）下，可先孵育 6min 后于
    340nm 处读取 A1，30min 后读取 A2，△A=A2-A1。
    【注】 1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间 T 到 60min 后或更长读取 A2，改变后的
    反应时间需代入计算公式重新计算。或适当增加样本取样质量 W，则改变后的反应时
    间 T 和样本质量 W 需代入计算公式重新计算。
    2. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对本试剂盒仅供科研使用
    2
    会偏高），可以适当减少样本加样量 V1（如减至 20μL，则试剂三相应增加），则改变
    后的加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。
    或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于检测；
    3．若上升趋势不稳定，可以每隔 2min 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段 T 参与
    计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本蛋白浓度计算
    单位定义：每毫克组织蛋白在每分钟内生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
    PDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(V1×Cpr) ÷T
    =53.6×ΔA÷Cpr
    2、按样本鲜重计算
    单位定义：每克组织在每分钟内生成 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
    PDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(W× V1÷V) ÷T
    =53.6×ΔA÷W
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.04mL；
    V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
    d---96 孔板光径，0.5cm；
    ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
    W---样本质量，g；
    T---反应时间，30min；
    Cpr---蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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