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醇酰基转移酶（AAT）活性测定试剂盒,微板法

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  • ￥1320
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  • WS6290W
  • 国内
  • 2025年07月23日
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    • 英文名：

      Alcohol acyltransferase (AAT) activity assay kit

    • CAS号：

      WS6290W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    醇酰基转移酶（alcohol O-acetyltransferase, AAT）活性试剂盒说明书
    （货号：WS6290W 微板法 48 样）
    一、产品简介：
    醇酰基转移酶（AAT，EC 2.3.1.84）是酯类化合物生物合成过程中的关键酶，研究表明
    该酶活性与果实中酯类化合物的含量呈正相关。
    醇酰基转移酶（AAT）催化乙酰 CoA 和醇类化合物生成酯类化合物和 CoA，生成的
    CoA具有还原性并可与 DTNB 作用生成黄色物质，该有色物质在 412nm 处有特征吸收峰，
    即可得出 MS 酶活性大小。
    反应式：acetyl-CoA+a primary alcohol=CoA+an acetyl ester
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 6mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    液体 1mL×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下使粉剂落入底部，
    再加入 1.1mL 蒸馏水溶解备用，
    试剂三
    液体 1mL×1 支
    4℃保存
    试剂四
    液体 0.5mL×1 支
    4℃保存
    标准品
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水
    四、醇酰基转移酶（AAT）活性测定：
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上
    清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
    ② 细菌/细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取
    液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
    12000rpm 4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 412nm。
    ② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 96 孔板中依次加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    50
    试剂一
    100
    试剂二
    20
    试剂三
    20
    混匀，30℃条件下孵育 10min，立即于
    412nm 处读取吸光值 A1，本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂四
    10
    混匀，30℃条件下反应 30min，立即于
    412nm 处读取吸光值 A2，ΔA=A2-A1。
    【注】：若ΔA 过小，可以延长反应时间 T（如：30℃条件下孵育 60min 或更长），或增加样本
    量 V1（如增至 100μL，则试剂一相应减少）。调整后的 T 或 V1 需代入公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.0644x - 0.008，x 是标准品质量：μg，y 是ΔA。
    2、按样本蛋白浓度计算：
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 辅酶 A 定义为一个酶活力单位。
    AAT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.008)÷0.0644]÷(V1×Cpr)÷T÷Mr×103=13.5×(ΔA+0.008)÷Cpr
    3、按样本鲜重计算：
    酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol 辅酶 A 定义为一个酶活力单位。
    AAT (nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.008)÷0.0644]÷(W×V1÷V)÷T÷Mr×103=13.5×(ΔA+0.008)÷W
    4 按细菌或细胞密度计算：
    酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1 nmol 辅酶 A 定义为一个酶活力单位。
    AAT (nmol/min/104 cell)=[(ΔA+0.008)÷0.0644]÷(500×V1÷V)÷T÷Mr×103=0.027×(ΔA+0.008)
    V1---加入样本体积，0.05mL； V---加入提取液体积，1mL； T---反应时间，30min；
    W---样本质量，g；
    CoA---Mr 分子量，767.5； 500---细胞或细菌总数，500 万；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（1mg/mL）：用 1mL 蒸馏水溶解标准品（母液需在两天内用且-20℃
    保存）。
    2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.04, 0.08, 0.12,0.16, 0.2 mg/mL。也可根据
    实际样本来调整标准品浓度。
    3 依据以下步骤操作，50μL 标准品+130μL 试剂一+20μL 试剂三，根据结果即可制作
    标准曲线。

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