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无锡耐思生命科技股份有限公司
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胰蛋白酶
胰蛋白酶(Trypsin)是一种丝氨酸水解酶,它能够把多肽链中赖氨酸和精氨酸 残基中的羟基侧切段,水解细胞间的蛋白质,破坏细胞间的连接,从而使组织或 贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓 度、温度和作用时间有关,在pH8.0和37°C时,胰酶的作用能力最强。因此,在使 用胰酶时,应当把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。一般常 用胰酶的工作浓度为0.25%,而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度 (0.05%)的胰酶进行细胞消化。 由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+,从而破坏细胞连接促进细胞的解离,因此在胰 酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用,以增强解离效果。对于EDTA可 能会干扰后续的测试分析时,推荐选择不含EDTA的消化液。具体请参考以下表 格选择合适的胰蛋白酶产品。
| 产品名称 | EDTA | 酚红 | 应用 | 货号 |
| 0.25%Tryps in-EDTA,无酚红 | √ | × | 改良型产品消化细胞时间更 短,消化效果媲美进口产品,特 别适用于难以消化的细胞。 | 211042 |
| 0.25%Trypsin-EDTA,酚红 | √ | √ | 211052 | |
| 0.25%Trypsin-no EDTA,无酚红 | × | × | 211062 |
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文献和实验取出所需分装管,并在规定时间内使用完毕,避免整管长时间暴露于室温。 4. 机械解离法 vs 酶解法 vs 组合法? 解离方法各有优缺点,根据不同组织类型和需求选择合适的解离方式。 (1)机械解离法:通过剪切、研磨、吹打等物理力破坏细胞间连接,无需酶试剂无需孵育时间成本较低,但是容易造成细胞损伤(如碎片多活率低)和解离不完全(如致密组织),常用于快速解离脾脏等柔软组织。 (2)酶解法:利用蛋白酶(胶原酶、胰酶、木瓜蛋白酶等)降解细胞外基质,温和解离保护细胞膜完整性,但是易破坏表位,且需要挑选合适
-132-997)进行进一步纯化以满足测序要求。 FFPE 样本(福尔马林固定石蜡包埋):甲醛固定导致蛋白质和核酸发生交联和片段化,无法用于制备活细胞。此类样本同样可以使用商业化试剂盒(130-134-089)分离细胞核进行 snRNA-seq 或使用解离试剂盒(130-118-052)解离分选后进行基因组分析。 自动化样本解离制备细胞平台 (1)传统细胞制备方法的局限性 传统的样本制备方法,尤其是对复杂实体组织(如肿瘤、脑组织、纤维化组织)的处理,长期以来严重依赖手动操作。手动解离
。 Q:检测凋亡用的细胞能否固定? A:甲醛固定液会造成结果假阳性,因此用于 Annexin V 凋亡检测的细胞不能进行固定。 需要注意的是,Annexin V 检测的样本为外周血时,勿使用含有多聚甲醛等固定液成分的红细胞裂解液来处理细胞。 Q:有没有更好的办法处理贴壁细胞,来做流式凋亡实验? A:检测贴壁细胞时,若消化时间不易控制,建议用 Accutase 细胞消化液,对细胞损伤小且不会改变细胞膜上 PS 的分布。 Q:Annexin V 系列有很多种不同组合试剂盒,该如何选
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