低内毒素人痰液弹性蛋白酶

中文名称：低内毒素人痰液弹性蛋白酶 英文名称：Low Endotoxin Human Sputum Elastase 来来源。脓性人类痰中的白细胞。 低内毒素<0.78欧盟/毫克。 EPC编号SE563的进一步纯化，通过固定化多粘菌素B上的色谱法去除内毒素，然后在0.2µ过滤器上过滤。 规格。 色谱纯化。冻干的、无盐的， 可溶性粉末。 在5°C下储存。稳定一年。 通过SDS-PAGE测定纯度大于95%。MW约29500。 不含组织蛋白酶G、MPO和溶菌酶。 特定活性。 1） 。使用Suc-Ala-Ala-Ala-pNA（EPC编号NS945）；800-900单位/mg蛋白质；一个单元将在pH 7.5和25°C下每分钟水解1 nM底物。 2） 。使用MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA（EPC编号FH237）；每毫克蛋白质16-18个单位；一个单元将在pH 7.5和25°C下每分钟水解1µM底物。方法中给出了测定程序。 准备工作。 用NaCl对脓性人类痰液进行分级，并用DNA酶处理以释放DNA结合蛋白。弹性蛋白酶通过琼脂糖DAPSA弹性蛋白可溶性（EPC产品编号AD477）上的亲和层析纯化，并通过羧甲基琼脂糖上的离子交换层析从组织蛋白酶中分离（62）。弹性蛋白酶在-15°C的琼脂糖丙氨酰丙氨酰丙氨酸上通过亲和层析进一步纯化（33）。当用Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA测定时，弹性蛋白酶不具有组织蛋白酶G活性。据报道，来自脓性人类痰液的弹性蛋白酶与来自人类白细胞的弹性酶具有相似的酶、抑制和物理化学性质（32）。 稀释剂和稳定性。 1.）1mg/ml于含有0.1M NaCl的0.05M NaOAc pH 5中。在5°C（冰中）下稳定7天。 2.）10mg/ml在50%甘油50%0.02M NaOAc pH 5中。在-20°C下稳定至少60天，在-20°C~5°C之间有20个循环。 3.）可以以10mg/ml溶解在2mM HoAc中，并以较小的量再次冻干。 在酸性（～pH5）缓冲液中的稳定性优于碱性缓冲液。由于胰蛋白酶如牛胰蛋白酶的自溶和/或蛋白水解，在pH 8.0时可能发生失活。苯脒可以抑制蛋白质水解。弹蛋白蛋白可以抑制自溶和蛋白水解。但是，弹性蛋白也是弹性蛋白酶的抑制剂（63）。低pH（~5）保护弹性蛋白酶免受自溶和蛋白水解。