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- wksubio
- WS6180F
- 国内
- 2025年12月03日
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- 详细信息
- 询价记录
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
乳酸含量试剂盒
- CAS号：
WS6180F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒说明书
（货号：WS6180F 分光法 48 样）
一、产品简介：
乳酸含量的异常升高与多种疾病如糖尿病和酸毒症等疾病有密切关系。L-乳酸是人体
中乳酸代谢的主要中间产物，并且存在于血液中。D-乳酸也存在，但含量极低只有 L-
乳酸的 1-5%。
本试剂盒提供一种快速、灵敏的检测方法：乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成*酮酸，
并使 NAD+还原生成 NADH；为了使该反应顺利进行另添加酶进一歩分解丙*酸；生成
NADH 与特异显色剂反应产生在 450nm 处有最大吸收峰的有色物质，通过检测该物质在
450nm 的增加量，进而计算出乳酸含量。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 2.1mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 1.1mL×1 支
4℃保存
试剂三
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 mL×1 支
4℃保存
试剂五
液体μL×2 支
-20℃保存 临用前甩几下使试剂落入底部，每 支分别加
0.55mL 蒸馏水溶解。
标准品
液体μL×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、天平、研钵、离心机。
四、乳酸（LA）含量测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：0.1g 组织样本，加 1mL 的提取液研磨，粗提液全部转移到 EP 管中，
12000rpm，离心 10min，上清液待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
于 4℃，12000g 离心 10min，取上清测定。
【注】：若增加样本量，可按细菌/细胞数量（104个）：提取液（mL）为 1000~5000：1 的比例进行提取
③ 液体样品：
a. 近似中性的液体样品可直接取 1mL 转移到 EP 管中；12000rpm，离心 10min，上清
液待测。
b. 酸性液体样本（如葡萄酒或果汁），则需先用 KOH（5M）调溶液 PH 值至约 8，并
在室温下孵育 30 分钟。取 1mL 转移到 EP 管中；12000rpm，离心 10min，上清液
待测。
④ 血清样本：澄清的血清样本可以直接检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
② 临用前试剂一、二、三、四可按照比例 40:20:540:20 混成混合液（用多少配多少量），本试剂盒仅供科研使用
2
下歩加样表中直接加 620μL 混合液。
③ 所有试剂解冻至室温（25℃）或在水浴锅（25℃）中孵育 10min，在 EP 管中依次
加入：
试剂名称（
μL）
测定管
空白管(仅做一个)
样本
60
0
试剂一
40
40
试剂二
20
20
试剂三
540
600
试剂四
20
20
试剂五
20
20
混匀，立即于 37℃条件下避光反应 30min，全部液体转移
至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，于 450nm 处读取吸
光值 A，△A=A 测定-A 空白。
【注】1. 若样本自身有很强的背景值（如颜色很深或含有还原性物质如抗坏血酸等），可以加设一个样
本自身对照：即试剂五用蒸馏水替代，其他试剂保持不变，则△A=A 测定-A 对照。
2. 若△A 值较小，可增加样本上样量 V1（如增至 100μL，则试剂三相应减少），则改变后的 V1
需代入计算公式重新计算。
3. 若△A 值较大，或 A 测定超过了标曲最高点，可对样本用蒸馏水稀释；或减少样本上样量 V1
（如减至 20μL，则试剂三相应增加），则稀释倍数 D 和改变后的 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 31.151x - 0.0022； x 为标准品摩尔质量（
μmol），y 为△A。
2、按照样本质量计算：
乳酸含量(µmol/g 鲜重)=[(△A+0.0022)÷31.151]÷(W×V1÷V)×D
=0.54×(△A+0.0022)÷W×D
3、按照细菌/细胞计算：
乳酸含量(µmol/104 cell)=[(△A+0.0022)÷31.151]÷(500×V1÷V)×D
=0.0011×(△A+0.0022)×D
4、按照液体体积计算：
乳酸含量(µmol/mL)=[(△A+0.0022)÷31.151]÷V1×D=0.54×(△A+0.0022)×D
5、按照血清体积计算：
乳酸含量(µmol/mL)=[(△A+0.0022)÷31.151]÷V1×D=0.54×(△A+0.0022)×D
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入反应体系中样本体积，0.06mL；
W---样本质量，g；
500---细胞数目，万；
乳酸分子量 Mr---90.08；
D---稀释倍数，未稀释即为 1。
附：标准曲线制作过程：
1
标准品母液（30μmol/mL）：临用前取 1mL 蒸馏水至 2mLEP 管中，再向 1mL 蒸馏水中加入 3μL
的标准品，混匀，即得标准品母液浓度为 30μmol/mL。
2
把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.06, 0.12, 0.18, 0.24, 0.3. μmol/mL。
3
依据测定管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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