本试剂盒仅供科研使用
延胡索酸酶（Fumarate Hydratase）活性试剂盒说明书
（货号：WS9680F 紫外法 48 样）
一、产品简介：
延胡索酸酶又名延胡索酸水化酶（EC 4.2.1.2），存在于线粒体中的富马酸酶是柠檬酸
循环中的关键酶之一，存在于胞质中的富马酸酶与氨基酸和富马酸酯的代谢关系密切。
在人类中，该酶缺失会导致严重的健康问题，例如胎儿脑畸形，肌张力低下等。
延胡索酸酶催化延胡索酸转化成 L-苹果酸，L-苹果酸在苹果酸脱氢酶的作用下，同
时使 NAD+还原成 NADH，通过检测 NADH 在 340nm 的增加速率得出延胡索酸酶的活
性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 60mL×1 瓶
-20℃保存
试剂二
液体 15mL×1 瓶
-20℃保存
试剂三
液体 0.5mL×1 瓶
-20℃保存
试剂四
粉体 mg×1 支
-20℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底
部，再加 3.2mL 蒸馏水溶解，
可分装保存。
试剂五
粉体 mg×1 支
-20℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底
部，再加 1.7mL 蒸馏水溶解，
-20℃保存。
试剂六
液体μL×1 支
-20℃保存
临用前甩几下使试剂落入底
部，再加 1.6mL 蒸馏水溶解，
-20℃保存。
试剂七
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂八
液体 mL×1 支
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、低温离心机、研钵。
四、延胡索酸酶活性测定：
1.线粒体制备（提示：整个线粒体的提取过程须保持 4℃低温环境）：
① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀浆，转
移至离心管后于 4℃×700g 离心 10min。
2 弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃×12000g 离心 10min。上清液即胞浆提取物，
可用于测定胞浆中的延胡索酸酶（此步可选做），沉淀为线粒体。
3 在沉淀（线粒体）中加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或
200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），液体置于冰上用于线粒体中延胡索酸酶活性测
定。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取，或按照细胞数
量(104)：提取液(mL)为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称（
μL）
测定管
样本
60
试剂四
60
试剂五
30
试剂六
30
试剂七
490
混匀，37℃孵育 20min
试剂八
30
混匀，立即于 340nm 下读取各管吸光值 A1，
37℃孵育 30min 后读取 A2，ΔA=A2-A1。
【注】1. 若提完的线粒体检测液样本中蛋白含量过高（如呈现浑浊状态），需减少样本加样量（如减至 30μL，
则试剂七相应增加），则改变后的样本体积 V1 代入计算公式重新计算。
2. 若△A 差值较小，可以延长反应时间 T（如增至 60min 或更长），或加大样本量 V1（如增至 100μL，
试剂七相应减少），则改变后的反应时间 T 和样本体积 V1 代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：在 37℃下，每毫克组织蛋白每分钟产生 1 nmol NADH 为一个酶活单位。
延胡索酸酶活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr) ÷T
=62.5×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
酶活定义：在 37℃下，每克组织每分钟产生 1 nmol NADH 为一个酶活单位。
延胡索酸酶活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=12.6×ΔA÷W
3、按细菌/细胞密度计算：
酶活定义：在 37℃下，每 1 万个细菌/细胞每分钟产生 1 nmol NADH 为一个酶活单位。
延胡索酸酶活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.025×ΔA
V1---加入样本体积，0.06 mL；
V---加入提取液体积，0.202 mL；
V2---反应体系总体积，7×10-4 L；
d---光径，1cm；
T---反应时间，30 min；
W---样本质量，g；
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm； 500---细胞数量，万；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
文献和实验
