- ￥1820
- 弗元生物 Fuyuanbio
- RC200136
- 上海
- 2026年02月02日
企业认证
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- 技术资料
- 供应商：
弗元（上海）生物科技有限公司
- 库存：
10000
- 英文名：
human umbilical cord mesenchymal stem cells medium(chemical defined ）
- 规格：
500ML
| 货号 | 产品名称 | 目录价（元） |
| RC200136 | 人脐带间充质干细胞无血清培养基 | 2160 |
可用于人脐带间充质干细胞的原代、扩增培养，也可用于脐带间充质干细胞外泌体研究和外泌体提取等。
产品信息
产品名称：人脐带间充质干细胞无血清培养基
货号：RC200136
批号：见包装
试剂清单：
| 序号 | 名称 | 数量 | 货号 | 存储 |
| A | 人脐带间充质干细胞基础培养基 | 450 ml × 1 | RC200136-A | 2-8℃ |
| B | 人脐带间充质干细胞添加剂 | 50 ml × 1 | RC200136-B | -20℃ |
组分A于2-8℃保存，组分B于-20℃保存。所有组分均须避免反复冻融及复温，各组分在所需要的温度下有效期为1年，配制完成的完全培养基于2-8℃保存，稳定储存2-3周。
适用细胞：
适用于人脐带间充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养。
产品介绍
人脐带间充质干细胞培养基是一款化学成分明确的新一代培养基，专门为人脐带间充质干细胞（hUMSC）培养设计，能够支持人脐带间充质干细胞生长、扩增，无需培养表面包被就能让细胞较好地贴壁，可有效延缓细胞在体外培养时的老化。可用于人脐带充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养，并保持人脐带间充质干细胞的多种生物学特性及多向分化潜能，培养的人脐带间充质干细胞具有成骨、成脂、成软骨的分化能力，正常人脐带间充质干细胞表达CD73、CD90、CD105、CD166，不表达CD11b、CD31、CD34、CD45和HLA-DR。人脐带间充质干细胞在此培养基条件下可稳定传代约20代，但不具有无限传代能力。
操作方法
实验准备
u 人脐带间充质干细胞完全培养基配制：
1. 添加剂处理：室温解冻人脐带间充质干细胞培养基添加剂（FY200013-B）。添加剂融化后轻轻充分摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即存储于-20℃至-80℃，避免反复冻融。
注意：添加剂解冻不可加热，建议采用室温溶解。
2. 完全培养基配制：将添加剂以10%比例加入到人脐带间充质干细胞基础培养基（FY200013-A）中，充分混匀，即配制成人脐带间充质干细胞完全培养基（FY200013）。完全培养基在2-8℃可稳定储存2-3周，超过3周的完全培养基请谨慎使用。
注意：混合成人脐带间充质干细胞培养基后必须充分混匀，2-8℃保存。整个过程确保无菌操作，各试剂开封前以75%酒精擦拭表面。完全培养基使用前务必室温复温至少30分钟，该操作适用于下列所有用到完全培养基的步骤。
u 自备试剂：
l 消化液（0.25%Trypsin-0.04%EDTA或其他）
l 无钙镁的磷酸盐缓冲液（DPBS）
l 细胞冻存液
操作方法（仅供参考，请根据各自实验需求自行制定操作规程）
u 原代细胞培养（酶消化法）：
1. 该部分以单细胞悬液为操作起始。使用胰酶、胶原酶、分散酶等酶消化法（推荐使用组织细胞消化液RC200104）从人脐带华通氏胶组织获得。
2. 原代接种：以上获得的细胞沉淀，漩涡震荡使其分散为单个细胞，加入适量的完全培养基，充分混匀。200 g离心5-10分钟。弃去上清，漩涡震荡使沉淀分散为单个细胞，加入适量的完全培养基，充分混匀。按照一定的细胞密度接种与培养器皿中。37℃、5%CO2、饱和湿度静置培养48小时。该时间段内请勿移动培养器皿，也无需观察。48小时后观察细胞，根据情况选择半量或全量更换新鲜完全培养基。
注意：细胞培养务必选择合适的贴壁细胞培养器皿，若培养器皿不合适则严重影响细胞的贴壁、增殖甚至存活。
3. 换液培养：后每48小时更换新鲜培养基。观察细胞，弃去原培养上清。若悬浮细胞较多，则可用DPBS轻轻洗涤细胞1-2次。添加新鲜完全培养基继续培养。
4. 传代：原代细胞传代以克隆大小和克隆中心细胞密度为标准。若克隆中心细胞密度较大，则不论整个培养器皿是否长满均应进行传代操作。弃去培养上清，加入适量的DPBS，轻轻晃动后弃去DPBS，重复洗涤2-3次。加入适量的0.25%胰蛋白酶消化液（推荐使用间充质干细胞消化液，RC200108）室温消化2分钟，加入5倍体积的完全培养基终止消化。用移液管、吸管或移液枪头等轻轻吹打细胞，使细胞从培养皿表面脱落。
注意：足量的胰酶消化，室温消化不宜超过2分钟，吹打细胞时也不宜力量过大，轻轻吹打即可，不脱落细胞直接丢弃。
5. 冻存：参照下述“hUMSC细胞冻存”。
u 原代细胞培养（组织块法）：
1. 该部分以组织块作为起始。组织块为脐带华通氏胶切成1-3 mm3大小的组织块。
2. 原代接种：用缓冲液清洗过的组织块，用适量的完全培养基悬浮，300目无菌滤网过滤或200 g离心5-10分钟，收集组织块。用适量的完全培养基重新悬浮组织块，均匀接种于培养器皿中，37℃、5%CO2、饱和湿度静置培养。48小时内最好不要对培养器皿进行任何移动。
3. 换液：48小时后进行半量或全量更换新鲜完全培养基，具体视情况而定。每2天更换新鲜培养液。组织块周围有密度较高的细胞时，可以选择去除组织块。
4. 传代：参照上述“传代”方法。
5. 冻存：参照下述“hUMSC细胞冻存”。
u hUMSC细胞传代培养（非原代）：
1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。
2. 弃去培养上清，加入DPBS溶液清洗1次，加入细胞消化液（推荐使用间充质干细胞消化液，RC200108）使其完全覆盖培养器皿底部。
3. 室温孵育1-2分钟，轻轻拍打培养器皿，显微镜下观察大部分细胞从培养器皿底部脱落后立即停止消化。
4. 加入消化液2倍体积的人间充质干细胞完全培养基，用移液器轻轻吹打培养器皿表面未完全脱离的细胞，使细胞完全脱落并均匀分散。
5. 将细胞悬液转移到离心管中，200 g离心5分钟。
6. 弃上清，加入完全培养基，重悬细胞，计数。1：3-1：6比例传代，均匀铺在培养器皿中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养。
u hUMSC细胞复苏：
1. 从液氮中取出冻存的hUMSC细胞，迅速将冻存管/冻存袋放入复苏装置或37℃水浴快速融化。
2. 将解冻后的细胞悬液缓慢加入适量完全培养基（冻存体积与培养基的体积比为1：5-1：10）。
3. 200 g离心5分钟，弃去上清，加入适量的完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞均匀铺到培养器皿中，摇动培养器皿使细胞均匀分布，37℃、5%CO2、饱和湿度培养，24小时后观察细胞状态。
5. 24小时后更换新鲜完全培养基继续培养，以后每2天更换新鲜完全培养基。
注意：细胞传代所需的时间：2-4天。hUMSC消化极易过度，建议稀释0.25%胰酶消化液一倍，且严格控制消化时间，消化时长从细胞接触胰酶开始不宜超过2分钟。
u hUMSC细胞冻存
1. 细胞达到90%汇合度，弃去原有培养基，DPBS清洗1次。
2. 加入细胞消化液（推荐使用间充质干细胞消化液，RC200108）使其完全覆盖培养器皿底部，室温孵育1-2分钟，轻轻拍动培养器皿，显微镜下观察大部分细胞从培养器皿底部脱落后立即停止消化。
3. 加入消化液2倍体积的人间充质干细胞完全培养基，用移液器轻轻吹打培养器皿地面未完全脱离的细胞，使细胞完全脱落并均匀分散。
4. 将细胞悬液转移到离心管中，200 g离心5分钟，弃去上清。
5. 加入适量细胞冻存液（推荐使用细胞冻存液Ⅱ，RC200106），调整细胞冻存密度在1×106 cells/cm2左右，每支冻存管分装0.5-1 ml，使用冻存袋冻存请自行根据需要选择冻存方案。
6. 程序降温仪冻存，或放入冻存盒然后置于-80℃或直接放入-80℃，24小时后转入液氮中长期保存。
注意：此处消化液为胰酶消化液。细胞冻存方法有多种，此处介绍的冻存方法为含有DMSO的冻存方式。其他冻存方式请根据需要自行选择。
特别提示：以上所有操作均在无菌细胞培养室进行，细胞开放操作要在生物安全柜内进行；培养器皿包括培养皿、培养瓶、培养板、细胞工厂等，请根据实验需要自行选择；hUMSC切忌消化过度，过度的消化会导致细胞快速老化，且失去部分或全部分化能力；实验室具体可操作的传代次数请自行分析判断，并建议以分化能力进行判别；该培养基仅用于hUMSC细胞培养，操作规程仅作为参考。
细胞形态展示：
弗元生物是国家高新技术企业、上海市科委认定的科技型企业，致力于打造具有国际影响力的生物医学品牌。公司以干细胞与再生医学研究为核心，业务经营范围辐射生物医学领域的多个相关学科。团队拥有自主研发的核心知识产权，在国际期刊杂志发表论文8篇，中文核心期刊发表论文1篇，申请国家发明专利7项，已获得授权的实用新型专利2项，拥有注册商标9项。
生命科学部，已经形成以无血清培养基、类器官分化试剂盒为旗帜产品的充质干细胞、再生医学与器官发育等多个产品系列；肝类器官分化试剂盒为国内开创性肝类器官产品；产品已获得nature communications、cell proliferation、stem cell research and therapy等杂志文献引用。技术服务部，服务了多家知名企业和科研机构，在再生医学的基础和转化研究完善了服务体系。
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文献和实验趋势而出现的，许多无蛋白培养基添加了植物水解物以替代动物激素、生长因子的作用。市场上已有适合多种细胞生长的无蛋白培养基。 二、限定化学成分培养基(chemical defined medium,CDM):是指培养基中的素有成分都是明确的，它同样不含有动物蛋白，同样也不是添加了植物水解物，而是使用了一些已知结构与功能的小分子化合物，如短肽、植物激素等。这种培养基更有利于分析细胞的分泌产物。目前已经有适合于293细胞 、CHO细胞、杂交瘤细胞生长的CDM问世，上海恒利安生物科技有限公司生产
培养基就是为了适应这发展趋势而出现的，许多无蛋白培养基添加了植物 水解物以替代动物激素、生长因子的作用。市场上已有适合多种细胞生长的无蛋白培养基。 二、限定化学成分培养基(chemical defined medium,CDM):是指培养基中的素有成分都是明确的，它同样不含有动物蛋白，同样也不是添加了植物水解物，而是使用了一些已知结构与功能的小分子 化合物，如短肽、植物激素等。这种培养基更有利于分析细胞的分泌产物。目前已经有适合于293细胞 、CHO细胞、杂交
。 4、培养细胞时，如何去除血清来源的外泌体？ 多数情况下，细胞在体外培养时需要血清，而血清中一般都含有外泌体，为避免血清对细胞外泌体的污染，可采用以下两种方法： 将细胞培养用的血清通过 1×105g 超速离心 >10 h 以去除血清外泌体； 选择无血清完全替代培养基进行细胞培养。 5、无外泌体血清（或者外泌体专用培养基）在什么时候使用？ 使用无外泌体血清培养基：细胞在正常含血清的培养基中培养一定的时间后，细胞汇合度在60% - 70% 时，移去原有含血清的培养基，换成新鲜的无外泌体血清培养基，继续
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