- ￥2180
- wksubio
- WS4060W
- 国内
- 2025年11月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Plant Triose Phosphate Isomerase (TPI) Kit
- CAS号：
WS4060W
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
96T
本试剂盒仅供科研使用
植物磷酸丙糖异构酶（Triose-phosphate isomerase，TPI）试剂盒说明书
（货号：WS4060W 微板法 96 样）
一、产品简介：
植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶（EC 5.3.1.1, TPI 或 TIM）是光合作用中参与 calvin 循环
的重要酶。磷酸二羟*酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质，并在其中逐步转化为蔗糖。
TPI 转化磷酸二羟*酮转化为甘油醛 3-磷酸，接着与酶混合物作用，伴随着 NADH 的生
成，通过检测 NADH 在 340nm 处的增加速率，进而计算出 TPI 酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液一
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
提取液二
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体μL×1 支
-20℃保存
用前先离心或甩几下使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
试剂二
粉体 mg×1 支
-20℃保存
用前先离心或甩几下使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
粉体 mg×1 支
-20℃保存
用前先离心或甩几下使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、研钵、震荡仪。
四、磷酸丙糖异构酶（TPI）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 总TPI酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液二进行冰浴匀浆，于4℃，13000rpm
离心5min，取上清液测定。
② 胞浆和叶绿体 TPI 酶的分离：
称取约0.2g样本，加入1mL提取液一，冰浴匀浆后于4℃，1600rpm离心5min，弃沉淀，
取上清在4℃，5000rpm再次离心15min，取上清用于测定胞浆TPI酶活性，沉淀留用。
取上述沉淀加1mL提取液二，强力涡旋震荡15s，置于冰上(或冰箱)孵育15min，在4℃，
13000rpm离心5min，弃沉淀，取上清测定叶绿体中TPI酶活性。
【注】：a、测定总 TPI 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中
的 TPI，则按照步骤②提取粗酶液。
b、整个叶绿体的提取过程须保持4℃低温环境。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm，设定温度 25℃。
② 所有试剂刚从冰箱里面拿出需先解冻至室温（25℃）。
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管本试剂盒仅供科研使用
2
样本
10
试剂一
10
试剂二
10
试剂三
160
试剂四
10
轻轻混匀，于 340nm 处检测，10s 读取 A1，10min 后读取
A2，△A=A2-A1。
【注】 若△A 在零附近徘徊，可以延长反应时间 T（如 30min），或者加大样本
量 V1（如增至 20μL，则试剂三相应减少），则改变后的反应时间 T 和样
本量 V1 代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按照样本蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
TPI（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷（V1×Cpr）÷T
= 643.1×ΔA÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活定义：每克组织每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
TPI（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷（W ×V1÷V）÷T
= 643.1×ΔA÷W
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.01mL；
V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
d---96 孔板光径，0.5cm；
ε---NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
W---样本质量，g；
T---反应时间，10min；
Cpr---蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。
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文献和实验相关实验
与展望 以上是我们结合多种试剂盒的说明书和一些网上查到资料整理成文，并加入了我们在实际操作中行之有效的方法。引物设计，当然，可以用软件，用于RACE引物设计的原则，是按照我们实验室惯用的方法写成。上面提到的RNA提取的方法经过我们实验室多人的验证，因此，对于高等植物我们认为是比较合适的；但此方法没有在动物和菌类中验证过，其实，对于其它生物RNA的提取可以根据此方法稍加改进，一般来说只要操作得当，应该可以提出高质量的RNA。PCR反应条件的优化，是建立在引物设计特异性强和高质量的RNA
开始需要RNA作为引物;70年代初获得DNA拓扑异构酶，并对真核DNA聚合酶 特性做了分析研究;这些都逐渐完善了对DNA复制机理的认识。 在研究DNA复制将遗传信息传给子代的同时，提出了RNA在遗传信息传到蛋白质过程中起着中介作用的假说。1958年Weiss及Hurwitz等发现依赖于DNA的RNA聚合酶;1961年Hall和Spiege-lman用RNA-DNA杂增色证明mRNA与DNA序列互补;逐步阐明了RNA转录 合成的机理。 在此同时认识到蛋白质是接受RNA的遗传
植物磷酸丙糖异构酶(TPI)试剂盒,微板法
￥2180
