植物磷酸丙糖异构酶(TPI)试剂盒,微板法产品图

植物磷酸丙糖异构酶(TPI)试剂盒,微板法

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  • ￥2180
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  • WS4060W
  • 国内
  • 2026年05月27日
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    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 库存：

      大量

    • 英文名：

      Plant Triose Phosphate Isomerase (TPI) Kit

    • CAS号：

      WS4060W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    植物磷酸丙糖异构酶（Triose-phosphate isomerase，TPI）试剂盒说明书
    （货号：WS4060W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶（EC 5.3.1.1, TPI 或 TIM）是光合作用中参与 calvin 循环
    的重要酶。磷酸二羟*酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质，并在其中逐步转化为蔗糖。
    TPI 转化磷酸二羟*酮转化为甘油醛 3-磷酸，接着与酶混合物作用，伴随着 NADH 的生
    成，通过检测 NADH 在 340nm 处的增加速率，进而计算出 TPI 酶活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液一
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    提取液二
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体μL×1 支
    -20℃保存
    用前先离心或甩几下使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
    试剂二
    粉体 mg×1 支
    -20℃保存
    用前先离心或甩几下使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
    试剂三
    液体 20mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂四
    粉体 mg×1 支
    -20℃保存
    用前先离心或甩几下使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、研钵、震荡仪。
    四、磷酸丙糖异构酶（TPI）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 总TPI酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液二进行冰浴匀浆，于4℃，13000rpm
    离心5min，取上清液测定。
    ② 胞浆和叶绿体 TPI 酶的分离：
    称取约0.2g样本，加入1mL提取液一，冰浴匀浆后于4℃，1600rpm离心5min，弃沉淀，
    取上清在4℃，5000rpm再次离心15min，取上清用于测定胞浆TPI酶活性，沉淀留用。
    取上述沉淀加1mL提取液二，强力涡旋震荡15s，置于冰上(或冰箱)孵育15min，在4℃，
    13000rpm离心5min，弃沉淀，取上清测定叶绿体中TPI酶活性。
    【注】：a、测定总 TPI 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中
    的 TPI，则按照步骤②提取粗酶液。
    b、整个叶绿体的提取过程须保持4℃低温环境。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm，设定温度 25℃。
    ② 所有试剂刚从冰箱里面拿出需先解冻至室温（25℃）。
    ③ 在 96 孔板中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管本试剂盒仅供科研使用
    2
    样本
    10
    试剂一
    10
    试剂二
    10
    试剂三
    160
    试剂四
    10
    轻轻混匀，于 340nm 处检测，10s 读取 A1，10min 后读取
    A2，△A=A2-A1。
    【注】 若△A 在零附近徘徊，可以延长反应时间 T（如 30min），或者加大样本
    量 V1（如增至 20μL，则试剂三相应减少），则改变后的反应时间 T 和样
    本量 V1 代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按照样本蛋白浓度计算
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    TPI（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷（V1×Cpr）÷T
    = 643.1×ΔA÷Cpr
    2、按照样本质量计算
    酶活定义：每克组织每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    TPI（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷（W ×V1÷V）÷T
    = 643.1×ΔA÷W
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.01mL；
    V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
    d---96 孔板光径，0.5cm；
    ε---NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
    W---样本质量，g；
    T---反应时间，10min；
    Cpr---蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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