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磷酸丙糖异构酶(TPI)试剂盒,微板法

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  • ￥2150
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  • WS4280W
  • 国内
  • 2025年12月09日
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    • 英文名：

      Triose Phosphate Isomerase (TPI) Kit

    • CAS号：

      WS4280W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    磷酸丙糖异构酶（Triose-phosphate isomerase，TPI）试剂盒说明书
    （货号：WS4280W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    磷酸丙糖异构酶（EC 5.3.1.1，TPI 或 TIM）是糖酵解的重要酶。使磷酸甘油醛和磷酸二
    羟丙*之间互相转化，从而维持这两种磷酸酯的平衡。TPI 可将糖酵解与戊糖磷酸途径和
    脂质代谢连接起来，且是一种几乎存在于所有生物中的稳定同型二聚体。
    本试剂盒提供一种快递、简单且灵敏的检测方法，TPI 转化磷酸二羟*酮转化为甘油醛
    3-磷酸，接着与酶混合物作用，同时与特异显色探针反应生成在 450nm 处有最大吸收峰的
    物质。通过检测 450nm 处光吸收增加量即可得到 TPI 酶活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体μL×1 支
    -20℃保存
    用前先离心或甩几下使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
    试剂二
    粉体 mg×1 支
    -20℃保存
    用前先离心或甩几下使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
    试剂三
    液体 1mL×1 支
    4℃保存
    试剂四
    液体 20mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂五
    粉体 mg×1 支
    -20℃保存
    用前先离心或甩几下使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。
    标准品
    粉体 mg×1 支
    -20℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、研钵、震荡仪。
    四、磷酸丙糖异构酶（TPI）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    称 0.1g 组织样本，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，于 4℃，12000rpm 离心 10min，取
    上清液测定。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min，调节波长至 450nm，设定温度 25℃。
    ② 所有试剂刚从冰箱里面拿出需先解冻至室温（25℃）。
    ③ 在 96 孔板中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    10
    试剂一
    10
    试剂二
    10
    试剂三
    10
    试剂四
    150
    试剂五
    10本试剂盒仅供科研使用
    2
    轻轻混匀，于 450nm 处检测，20s 读取 A1，10min 后读取
    A2，△A=A2-A1。
    【注】1. 若△A 在零附近徘徊，可以延长反应时间（如 30min），或者加大样本量
    （如：20μL），则试剂四相应减少。
    2. 若样本自身背景值较高，可设置一个自身对照（即试剂五用蒸馏水替代，
    其他不变），△A=△A 测定-△A 对照。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.1011x - 0.0022，x 是标准品摩尔质量（nmol），y 是△A。
    2、按照样本蛋白浓度计算
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    TPI（nmol/min/mg prot）=（ΔA+0.0022）÷0.1011÷（V1×Cpr）÷T= 98.9×（ΔA+0.0022）÷Cpr
    3、按照样本质量计算
    酶活定义：每克组织每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    TPI（nmol/min/g 鲜重）=（ΔA+0.0022）÷0.1011÷（W ×V1÷V）÷T= 98.9×（ΔA+0.0022）÷W
    V：加入提取液体积，1mL；
    V1：加入样本体积，0.01mL；
    T：反应时间，10 min；
    W：样本质量，g；
    Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 1.41ml 蒸馏水（母液需在两
    天内用且-20℃保存）。
    2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol /μL。也可根据实
    际样本来调整标准品浓度。
    3 依据加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

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