本试剂盒仅供科研使用
3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS8190F 分光法 24 样）
一、产品简介：
3-磷酸甘油酯酶（GPP，EC3.1.3.21）催化 3-磷酸甘油脱下磷酸根离子形成甘油，是甘
油合成过程中的最后一步酶促反应，该酶活性的高低直接决定甘油的生成水平。
本试剂盒采用 3-磷酸甘油为底物，用钼酸铵显色剂测定单位时间内酶催化产生的磷酸
根离子的量，进而得出 3-磷酸甘油酯酶的活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 35mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 瓶
-20℃保存
用前甩几下或离心使粉剂落入底
部，临用前加 3.6mL 蒸馏水溶解
备用。用不完的试剂 4℃保存。
试剂二
液体 3mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
A:粉体 mg×1 瓶
B:液体 3mL×1 瓶
4℃保存
临用前在试剂 A 中加 2.7mL 的 B
液，再加 34.8mL 的蒸馏水，混
匀溶解备用。用不完的试剂 4℃
保存，若试剂变色则舍弃。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
【注】：全程操作需无磷环境；试剂配置最好用新的枪头和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿，
免磷污染。
三、所需的仪器和用品：
分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、
研钵、冰。
四、α-磷酸甘油酯酶（GPP）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g）到研钵内，加入 1mL 提取液，在冰上进
行冰浴匀浆或者液氮研磨。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
[注]：也可以按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/真菌样本：
先收集细菌/真菌到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌/真菌加入 1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细菌/真菌（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
[注]：也可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取）
③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 700nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入下列试剂：本试剂盒仅供科研使用
2
③ 显色反应，在 EP 管中加入：
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.6624x - 0.003，x 是标准品摩尔质量（μmol/mL）, y 是△A。
2、按蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白分解底物产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
GPP(μmol/h/mg prot)= [(△A+0.003)÷0.6624×V2] ÷（V1×Cpr）÷T=12.08×(△A+0.003)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
定义：每小时每克组织分解底物产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
GPP(μmol/h/g 鲜重)= [(△A+0.003)÷0.6624×V2]÷(W× V1÷V)÷T=12.08×(△A+0.003)÷W
4、按细菌或细胞密度计算：
定义：每小时每 1 万个细菌或细胞分解底物产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
GPP(μmol/h /104 cell)= [(△A+0.003)÷0.6624×V2]÷(500×V1÷V)÷T=0.024×(△A+0.003)
5、按液体体积计算:
定义：每小时每毫升液体分解底物产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
GPP(μmol/h/mL)=[(△A+0.003)÷0.6624×V2]÷V1÷T=12.08×(△A+0.003)
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入样本体积，0.06mL ；
V2---酶促反应总体积，0.24mL；
T---反应时间，1/2 小时；
W---样本鲜重，g；
500---细菌或细胞总数，500 万。
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1. 制备标准品母液（5μmol/mL）：标准品用 10mL 试剂一溶解。（母液需在两天内用）。
2. 把母液稀释成六个浓度：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmol/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3. 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
60
提取液
60
60
试剂一
60
60
混匀，37℃孵育 30min。
试剂二
60
60
样本
60
混匀，12000rpm，4℃离心 5min，取上清待测。
上清液
150
150
试剂三
600
600
混匀，室温静置 3min，全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿
（光径 1cm），700nm 下读取各管吸光值 A，
△A=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。
文献和实验
