本试剂盒仅供科研使用
Mg2+ - ATP 酶活性测定说明书
（货号:WS0980F 分光法 24 样）
一、产品简介：
Mg2+-ATP 酶与细胞维持胞内 Mg2+浓度有关， 可在运输 Mg2+的同时催化 ATP 水解生
成 ADP 和无机磷。通过测定无机磷的量可确定该酶活性高低。
二、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液
器、研钵、冰和蒸馏水。
三、试剂盒的组成和配制：
【注】：全程操作需无磷环境；试剂配置最好用新的枪头和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿，避
免磷污染。
四、Mg2+-ATP 酶活性检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min，取
上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量(104)：提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 700nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 EP 管中依次加入：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
提取液 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再加 18mL
蒸馏水，混匀溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
-20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部，再加
9mL
蒸馏水，混匀溶解备用。
试剂三
液体 9mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
A:粉体 mg×1 瓶
B:液体 1mL×1 瓶
4℃保存
临用前向 A 试剂中加 1.35mL 的 B 液，
再加 17.4mL 的蒸馏水，混匀溶解备用。
标准品
粉体 mg ×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
试剂一
300
300
试剂二
300本试剂盒仅供科研使用
2
④ 显色反应：
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 2.0283x - 0.0002，x 是标准品摩尔质量（
μmol/mL）, y 是△A。
2、按蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/mg prot)=[(△A+0.0002)÷2.0283×V2]÷(V1×Cpr)÷T=5.18×(△A+0.0002)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
定义：每小时每克组织分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/g 鲜重)=[(△A+0.0002)÷2.0283×V2]÷(W×V1÷V)÷T=5.18×(△A+0.0002)÷W
4、按细菌或细胞密度计算：
定义：每小时每 1 万个细菌或细胞分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/104 cell)=[(△A+0.0002)÷2.0283×V2]÷(500×V1÷V)÷T=0.0104×(△A+0.0002)
5、液体中 Mg2+-ATPase 活力计算：
定义：每小时每毫升液体分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
酶活力(μmol/h/mL)=[(△A+0.0002)÷2.0283×V2]÷V1÷T=5.18×(△A+0.0002)
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入样本体积，0.3mL ；
V2---酶促反应总体积，1.05mL；
T---反应时间，1/3 小时；
W---样本鲜重，g；
500---细菌或细胞总数，500 万。
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（
5μmol/mL）：标准品用 10mL 蒸馏水溶解。（母液需在两天内用）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.42, 0.5. μmol/mL。也可根据
实际样本来调整标准品浓度。
3 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
蒸馏水
300
样本
300
300
37℃ 孵育 20min
试剂三
150
150
混匀，12000rpm，4℃离心 5min，上清液待测
上清液
450
450
试剂四
300
300
混匀，室温静置 10min，700nm 下读取各管吸光值，
△A=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。
文献和实验
技术资料