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氨基酸(AA)含量试剂盒,微板法

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  • ￥190
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  • WS5140W
  • 国内
  • 2025年11月05日
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    • 英文名：

      Amino Acid (AA) Content Kit

    • CAS号：

      WS5140W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒说明书
    （货号：WS5140W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    氨基酸是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质分解产物的种类之一。游离氨基酸与果蔬
    品质，采后生理，氮素代谢等有密切的关系。也能反映动物肝脏、肾脏的生理状态。
    本试剂盒采用茚三酮显色法测定氨基酸：在酸性条件下，氨基酸与茚三酮共热能产生蓝
    紫色化合物二酮茚胺，经光谱扫描在 570 nm 有特征吸收峰；通过测定 570 nm 吸光度，来
    计算氨基酸含量。
    二、测试盒组成和配制：
    [注]：粉剂量在 mg 级别，使用前用手甩几次或者进行离心，打开直接加入要求的试剂即可。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。
    四、氨基酸(AA)含量的测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.2g 组织），加入 1mL 提取液，进行室温匀浆，
    12000rpm，4℃离心 10min，上清液置冰上待测。
    [注]:也可按照组织质量（
    g）提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    ② 细菌或细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，
    进行室温匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，上清液置冰上待测。
    [注]:也可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例提取。
    ③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 570 nm。
    ② 在 EP 管中按照下表依次加入试剂：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    空白管（只做一次）
    蒸馏水
    40
    上清液
    40
    反应 mix
    560
    560
    试剂三
    40
    40
    混匀，盖紧盖（可用封口膜缠绕，防止水分散失），
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 110mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂×4 瓶
    4℃保存
    临用前每瓶加入 1.5mL 无水乙醇，盖
    紧后充分混匀，再加入 13.5mL 试剂
    一混匀制备成反应 mix,10 天内用完。
    试剂三
    粉剂×1 支
    4℃保存
    临用前加 4.5mL 蒸馏水,充分溶解
    标准品
    液体×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂本试剂盒仅供科研使用
    2
    置沸水浴中 15 min，取出后冷却至室温并摇晃混匀约 1min。
    95%乙醇
    320
    320
    混匀，取 200μL 澄清液体（若浑浊可 8000rpm 室温离心 5min）
    于 96 孔板中，在 570nm 读取吸光值 A，△A=A 测定- A 空白。
    【注】若 A 测定值大于 1.5，可用蒸馏水把上清液稀释后再按照加样表重新测定，
    则稀释倍数 D 代入公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.3963x + 0.006；x 是标准品摩尔浓度(μmol/mL)，y 是ΔA。
    2、按样本质量计算：
    氨基酸含量(μmol/g 鲜重)=[(ΔA-0.006)÷0.3963×V1]÷(V1÷V×W)×D
    =2.52×(ΔA-0.006)÷W×D
    3、按细胞数量计算：
    氨基酸含量(μmol/104 cell)=[(ΔA-0.006)÷0.3963×V1]÷(V1÷V×细胞数量)×D
    =2.52×(ΔA-0.006)÷细胞数量×D
    4、按照液体体积计算：
    氨基酸含量(μmol/mL)=[(ΔA-0.006)÷0.3963×V1]÷V1×D=2.52×(ΔA-0.006)×D
    V---样品提取液总体积，1mL；
    V1---加入样本体积，0.04 mL；
    W---样品质量，g。
    D---稀释倍数，未稀释即为 1；
    附：标准曲线制作过程：
    1 标准品母液（10μmol/mL）；
    2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.μmol/mL。也可
    根据实际样本来调整标准品浓度。
    3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

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