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叶绿体3-磷酸甘油酸激酶(PGK)活性测定试剂盒

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  • ￥1500
  • wksubio
  • WS2160F
  • 国内
  • 2025年11月28日
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    • 英文名：

      Chloroplast 3-phosphoglycerate kinase (PGK) activity assay kit

    • CAS号：

      WS2160F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    叶绿体 3-磷酸甘油酸激酶(PGK)试剂盒说明书
    （货号：WS2160F 分光法 48 样）
    一、产品简介：
    叶绿体 3-磷酸甘油酸激酶(PGK)是卡尔文循环中的关键酶，催化 3-磷酸甘油酸和 ATP
    反应产生 1,3-二磷酸甘油酸，后者在 3-磷酸甘油醛脱氢酶和 NADH 作用下产生 3-磷酸甘
    油醛和 NAD+，通过测定 NADH 的下降量，进而得到 3-磷酸甘油酸激酶的活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液一
    液体 50mL×1 瓶
    4℃保存
    提取液二
    液体 50mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×1 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，再加 2.2mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂二
    粉剂 mg×3 支
    4℃保存
    用前取一支甩几下或离心使试剂
    落入底部，再加 0.4mL 蒸馏水溶解
    备用。
    试剂三
    液体μL×1 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂四
    液体 35mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂五
    粉剂 mg×1 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
    三、所需的仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、天平、震荡仪、低
    温离心机、研钵。
    三、叶绿体 3-磷酸甘油酸激酶（PGK）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    称取约 0.1g 植物组织样本，加入 1mL 提取液一，快速冰浴匀浆后于 4℃，1600rpm 离
    心 5min，弃沉淀，取上清再 4℃，5000rpm 离心 15min，弃上清留沉淀，向沉淀中加 1mL
    提取液二，强力涡旋震荡 15s，置于冰上(或冰箱)在 4℃孵育 15min，4℃，13000rpm 离心
    5min，取上清测定叶绿体中 3-磷酸甘油酸激酶(PGK)的酶活性。提示：整个叶绿体的提取
    过程须保持 4℃低温环境。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 紫外分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，设定温度 25℃，蒸馏水调零。
    ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
    ③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    80
    试剂一
    40
    试剂二
    20
    试剂三
    20
    试剂四
    600
    混匀，室温（25℃）条件下，孵育 10min
    试剂五
    20
    轻轻混匀，室温（25℃）条件下，30s 时于 340nm
    处读取吸光值 A1，10min 后再读取 A2，
    ΔA=A1-A2。
    【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 20min 后读取 A2，改变后的反应时间
    需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量(如 100μL，则试剂四相应减少)，则改变
    后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    2. 若下降趋势不稳定，可以每隔 20S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与
    计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    3. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会
    偏高），可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于
    检测；
    4. 若ΔA 的值大于 0.5，则需减少反应时间（如减少至 5min），或减少样本量（如 20μL），
    则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按照样本质量计算
    酶活定义：每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    NADH-GPK（nmol/min/g 鲜重）= [ ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(W×V1÷V) ÷T=156.8×ΔA÷W
    2、按样本蛋白浓度计算
    单位定义：每毫克组织蛋白在每分钟内氧化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
    NADH-GPK（nmol/min/mg prot）= [ ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(V1×Cpr) ÷T=156.8×ΔA÷Cpr
    ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
    d---比色皿光径，1cm；
    V---加入提取液体积，1mL；
    V1---加入样本体积，0.08mL；
    V2---反应体系总体积，0.78mL=7.8×10-4L；
    T---反应时间，10min；
    W---样本质量，g。

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