本试剂盒仅供科研使用
糖化酶(Glucoamylase)试剂盒说明书
（货号：WS9650F 分光法 24 样）
一、产品简介：
糖化酶，又称葡萄糖淀粉酶（EC 3.2.1.3），是一种外切型糖苷酶，它从淀粉的非还原性
末端水解α-1,4 糖苷键和α-1,6 糖苷键，将淀粉完全水解为葡萄糖，因此广泛的应用于酒精、
白酒、抗生素、氨基酸、有机酸，甘油，淀粉糖等工业中，是我国重要的工业酶制剂之一。
糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖，与 3,5-二硝基水杨酸生成红棕色化合物，在 540nm
处有最大光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比，可测定计算得糖化
酶的活力。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前用提取液于 80℃水浴溶
解，并定容至 10mL。
试剂二
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液
器、研钵、冰。
四、糖化酶活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上
清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细胞样本：
先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细胞加入 1mL 提取液；超声波破
碎细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；4ºC 约 12,000rpm
离心 10min，取上清作为待测样品。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温；
③ 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管本试剂盒仅供科研使用
2
样本
30
煮沸样本
30
试剂一
300
300
充分混匀，40℃反应 20min
试剂二
600
600
混匀，沸水浴（95-100℃）5min，流水冷却后，全部转移
至 1mL 玻璃比色皿中，于 540nm 处读取吸光值 A，△A=A
测定-A 对照（每个样本自身需做一个自身对照）。
【注】：1. 若ΔA 过小，可以延长 40℃反应时间 T（如：40min 或更长），或增加样本量 V1（如增至
60μL，则试剂二相应减小），重新调整的反应时间 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。
2. 若 A 值大于 1.8，可缩减 40℃反应时间 T（如：10min 或更短），或减少样本量 V1（如减
至 10μL，则试剂二相应增加），重新调整的反应时间 T 和 V1 需代入计算公式重新计算
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y= 0.0139x-0.0443，x 是标准品质量（
μg），y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
定义：每毫克组织蛋白每分钟分解可溶性淀粉产生 1μg 葡萄糖所需酶量为一个酶活单位。
糖化酶活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA+0.0443)÷0.0139]÷(V1×Cpr) ÷T=119.9×(ΔA+0.0443)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
定义：每克组织每分钟分解可溶性淀粉产生 1μg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0443)÷0.0139]÷(W×V1÷V) ÷T=119.9×(ΔA+0.0443)÷W
4、按细胞数量计算：
定义:每 104个细胞每分钟分解可溶性淀粉产生 1μg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(nmol /min /104 cell)=[(ΔA+0.0443)÷0.0139]÷(500×V1÷V)÷T=0.24×(△A+0.0443)
5、按照液体体积计算：
定义：每毫升液体每分钟分解可溶性淀粉产生 1μg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(nmol /min /104 cell)=[(ΔA+0.0443)÷0.0139]÷V1÷T=119.9×(ΔA+0.0443)
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.03 mL；
W---样本质量，g；
T---反应时间，20min；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（4mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天
内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.8, 1.6, 2.4, 3.2, 4 mg/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
文献和实验
