本试剂盒仅供科研使用
β-1,3-1,4-葡聚糖酶（β-1,3-1,4-glucanase）酶活试剂盒说明书
（货号：WS4750W 微板法 96 样）
一、产品简介：
β-1,3-1,4-葡聚糖酶（又称地衣多糖酶；EC 3.2.1.73）是一类重要的水解酶，可以水解谷物
中的β-1,3-1,4-葡聚糖，其在食品、饲料和纺织等领域的具有重要应用价值。
β-1,3-1,4-葡聚糖酶水解底物葡聚糖产生还原性糖。利用 3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的
量，在 540nm 读取吸光值，进而得出β-1,3-1,4-葡聚糖酶的活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 120mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 支
4℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水，80℃
水浴 10min 充分溶解，冷却至
室温待用。
试剂三
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、β-1,3-1,4-葡聚糖酶（
β-1,3-1,4-GA）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g）到研钵内，加入 1mL 提取液，在冰上进
行冰浴匀浆或者液氮研磨。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
[注】：也可以按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/真菌样本：
先收集细菌/真菌到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌/真菌加入 1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细菌/真菌（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：也可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：若是澄清液体，直接检测，若液体样本浑浊，需 4℃×12000rpm，离心 10min，
取上清液检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。
② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
50
50
试剂一
140
150
试剂二
10
混匀，37℃孵育 30min
试剂三
150
150本试剂盒仅供科研使用
2
混匀，95℃水浴 5min，取出后用自来水或冰水冷却至室温，
取 200μL 澄清液体于 96 孔板中，在 540nm 处读取吸光值
A，ΔA=A 测定管-A 对照管（每个样本做一个对照管）。
【注】:若ΔA 在零附近徘徊，可在样本制备时加大取样质量 W（如增至 0.5g）,或在上机检测
时加大上样量 V1（由 50μL 增加到 100μL，则试剂一相应减少，保持总体积不变），
或延长反应时间 T（如增至 60min）,则改变后的 W、V1 和 T 需带入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0123x - 0.035；x 为标准品浓度（
μg），y 为ΔA。
2、按蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-1,4-GA(μg/min/mg prot)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷(V1×Cpr) ÷T
=54.2×(ΔA+0.035)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织样本每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-1,4-GA(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷(W×V1÷V) ÷T
=54.2×(ΔA+0.035)÷W
4、按细菌/真菌数量计算：
酶活定义：每 1 万个细菌或真菌每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义一个酶活性单位。
β-1,3-1,4-GA(μg/min /104 cell)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷(500×V1÷V) ÷T=0.11×(ΔA+0.035)
5、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体中每分钟分解葡聚糖产生 1μg 还原性糖定义一个酶活性单位。
β-1,3-1,4-GA(μg/min/mL)=[(ΔA+0.035)÷0.0123]÷V1÷T=54.2×(ΔA+0.035)
V---提取液体积，1mL；
V1---样本上样体积，50μL =0.05mL；
T---反应时间，30min；
W---样本鲜重，g；
500---细菌/真菌总数，500 万；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品（1mg/mL）：从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL
蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖（母液需在两天内用且-20℃保存）。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据 50μL 标准品+150μL 试剂一+150μL 试剂三，混匀 95℃水浴 5min，取出后用自
来水或冰水冷却至室温，取 200μL 澄清液体于 96 孔板中，在 540nm 处读取吸光值
A，根据结果即可制作标准曲线。
文献和实验
