- ￥680
- wksubio
- WS2550W
- 国内
- 2025年09月28日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Trehalose Content Kit
- CAS号：
WS2550W
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
96T
本试剂盒仅供科研使用
海藻糖含量试剂盒（蒽酮比色法）说明书
（货号：WS2550W 微板法 96 样）
一、产品简介：
海藻糖(trehalose)是一种非还原性双糖，广泛存在于动植物、微生物和培养细胞中。具有
在干燥、干旱、冷冻、高渗透压等恶劣环境下保护核酸和蛋白质等生物大分子的作用，被
广泛用于医药、保健品、酶、食品等制品的保存。
本试剂盒用蒽酮-硫酸法测定海藻糖含量，利用糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱
水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在
620 nm 处有最大吸收，其颜色的深浅与糖含量成正比。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 120mL×2 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×3 瓶
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，每瓶
加 11mL 的浓硫酸溶解备用。剩余
试剂 4℃保存一周。
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、水浴锅、可调式移液器、研钵、浓硫酸和蒸馏水。
四、海藻糖含量测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织放入研钵中，加入 1mL 提取液进行研磨成匀浆，室温晃动提取
30min， 8000rpm 室温（25℃）离心 10min，取上清。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/真菌样本：
先收集细菌或真菌到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或真菌加入 1mL 提取
液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复
30 次），室温晃动提取 30min， 8000rpm 室温（25℃）离心 10min，取上清。
【注】：若增加样本量，可按照提取液体积(mL) ：细菌或真菌数量(104个)为 1：500~1000 的比例提取。
③ 液体样本：
取 0.1mL 液体加入 1mL 提取液涡旋混匀，室温晃动提取 30min， 8000rpm 室温（25℃）
离心 10min，取上清。
【注】：若增加样本量，可按照液体体积（mL）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm。
② 调节水浴锅至 95 度。
③ 先调2-3个样本做预测定，若吸光值A大于1.5，将样本用提取液稀释后（5-20倍）再
测定，计算公式中乘以相应的稀释倍数D。
④ 在 EP 管中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称（
μL）
测定管
空白管
样本
150
蒸馏水
150
试剂一
300
300
95-100℃沸水浴 3min，冷却后，混匀取 200μL 至 96 孔板
中，于 620nm 处读取吸光值 A，ΔA=A 测定-A 空白。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为：y = 0.0636x + 0.0033；x 为标准品质量（
μg），y 为吸光值 A。
2、按样本鲜重计算：
海藻糖含量(μg/g 鲜重)=[(ΔA-0.0033)÷0.0636]÷(W×V1÷V)×D=104.8×(ΔA-0.0033)÷W×D
3、按细菌或真菌密度计算：
海藻糖含量(μg/104cell)=[(ΔA-0.0033)÷0.0636]÷(500×V1÷V)×D=0.21×(ΔA-0.0033)×D
4、液体中海藻糖含量计算：
海藻糖含量(μg/mL)=[(ΔA-0.0033)÷0.0636]÷(V2×V1÷V)×D =1048×(ΔA-0.0033)×D
V---提取液总体积 1mL；
V1---反应体系中样本体积，150μL=0.15mL；
V2---液体体积，0.1mL；
W---样本质量，g；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
500---细菌或真菌总数，500 万。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 2mL 提取液（母液需在两天
内用且-20℃保存）。
2 把母液用提取液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1.mg/mL。
也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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