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海藻糖含量试剂盒,微板法

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  • ￥680
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  • WS2550W
  • 国内
  • 2025年09月28日
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    上海瓦兰生物科技有限公司
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    • 英文名：

      Trehalose Content Kit

    • CAS号：

      WS2550W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    海藻糖含量试剂盒（蒽酮比色法）说明书
    （货号：WS2550W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    海藻糖(trehalose)是一种非还原性双糖，广泛存在于动植物、微生物和培养细胞中。具有
    在干燥、干旱、冷冻、高渗透压等恶劣环境下保护核酸和蛋白质等生物大分子的作用，被
    广泛用于医药、保健品、酶、食品等制品的保存。
    本试剂盒用蒽酮-硫酸法测定海藻糖含量，利用糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱
    水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在
    620 nm 处有最大吸收，其颜色的深浅与糖含量成正比。
    二、试剂盒组分与配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 120mL×2 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉体 mg×3 瓶
    4℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部，每瓶
    加 11mL 的浓硫酸溶解备用。剩余
    试剂 4℃保存一周。
    标准品
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、水浴锅、可调式移液器、研钵、浓硫酸和蒸馏水。
    四、海藻糖含量测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织放入研钵中，加入 1mL 提取液进行研磨成匀浆，室温晃动提取
    30min， 8000rpm 室温（25℃）离心 10min，取上清。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    ② 细菌/真菌样本：
    先收集细菌或真菌到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或真菌加入 1mL 提取
    液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复
    30 次），室温晃动提取 30min， 8000rpm 室温（25℃）离心 10min，取上清。
    【注】：若增加样本量，可按照提取液体积(mL) ：细菌或真菌数量(104个)为 1：500~1000 的比例提取。
    ③ 液体样本：
    取 0.1mL 液体加入 1mL 提取液涡旋混匀，室温晃动提取 30min， 8000rpm 室温（25℃）
    离心 10min，取上清。
    【注】：若增加样本量，可按照液体体积（mL）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm。
    ② 调节水浴锅至 95 度。
    ③ 先调2-3个样本做预测定，若吸光值A大于1.5，将样本用提取液稀释后（5-20倍）再
    测定，计算公式中乘以相应的稀释倍数D。
    ④ 在 EP 管中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    空白管
    样本
    150
    蒸馏水
    150
    试剂一
    300
    300
    95-100℃沸水浴 3min，冷却后，混匀取 200μL 至 96 孔板
    中，于 620nm 处读取吸光值 A，ΔA=A 测定-A 空白。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程为：y = 0.0636x + 0.0033；x 为标准品质量（
    μg），y 为吸光值 A。
    2、按样本鲜重计算：
    海藻糖含量(μg/g 鲜重)=[(ΔA-0.0033)÷0.0636]÷(W×V1÷V)×D=104.8×(ΔA-0.0033)÷W×D
    3、按细菌或真菌密度计算：
    海藻糖含量(μg/104cell)=[(ΔA-0.0033)÷0.0636]÷(500×V1÷V)×D=0.21×(ΔA-0.0033)×D
    4、液体中海藻糖含量计算：
    海藻糖含量(μg/mL)=[(ΔA-0.0033)÷0.0636]÷(V2×V1÷V)×D =1048×(ΔA-0.0033)×D
    V---提取液总体积 1mL；
    V1---反应体系中样本体积，150μL=0.15mL；
    V2---液体体积，0.1mL；
    W---样本质量，g；
    D---稀释倍数，未稀释即为 1；
    500---细菌或真菌总数，500 万。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 2mL 提取液（母液需在两天
    内用且-20℃保存）。
    2 把母液用提取液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1.mg/mL。
    也可根据实际样本来调整标准品浓度。
    3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

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