本试剂盒仅供科研使用
细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）试剂盒说明书
（货号：WS8150W 微板法 48 样）
一、产品简介：
蔗糖酶即蔗糖转化酶（Invertase，E.C.3.2.1.26）在蔗糖代谢中催化蔗糖分解为果糖和葡萄糖，是高等
植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 PH 值，蔗糖转化酶分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两
种类型，许多报道均将中性转化酶同碱性转化酶看作一种转化酶。
AI 的最适 pH 为 3.0～5.0，AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI（B-AI：cell-wall binding acid
invertase）两种类型，前者分布在液泡中或细胞自由空间，后者存在于细胞间隙并结合在细胞壁上。B-AI
主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解，以维持库源之间蔗糖的浓度。
B-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，经光谱
扫描在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 B-AI 活性成正比。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液 A
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
提取液 B
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂×1 瓶
4℃保存
用前加入 7.5mL 试剂一充分溶解
备用；用不完的试剂 4℃保存;
试剂三
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅、移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 按照组织质量（
g）：提取液 A 体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液 A），进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 10min，弃上清，留沉淀。
② 沉淀中加入 1mL 蒸馏水，震荡混匀，12000rpm4℃离心 10min，弃上清，留沉淀。
③ 沉淀中加入 1mL 提取液 B 充分混匀，4℃浸提过夜，12000 rpm 4℃离心 20min，取
上清置冰上待测。
2、上机检测：
1 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
40
40
试剂一
100
200
试剂二
100
混匀， 37℃准确水浴 20min 后，95℃水浴 10min（用封口膜缠紧，
以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）
试剂三
100
100
混匀，95℃水浴 10min（用封口膜缠紧，以防止水分散失），流水冷本试剂盒仅供科研使用
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却后充分混匀，吸取 200μL 转移至 96 孔板中，540nm 处读取吸光值
A，ΔA=A 测定-A 对照（每个测定管需设一个对照管）。
【注】：1.若吸光值大于 1.5，可以用蒸馏水稀释样本后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数 D。
2.若ΔA 值在零附近徘徊，可增加样本加样体积 V1（如增至 80μL，则试剂一相应减少），或延
长 37℃水浴时间（如增至 40min 或更长），则相应的 V1 和 T 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为 y = 0.007x - 0.0234；x 为标准品质量（
μg），y 为ΔA。
2、按蛋白浓度计算：
单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)(μg/min/mg prot)=[(ΔA+0.0234)÷0.007]÷(V1×Cpr)÷T×D
=178.6×(ΔA+0.0234)÷Cpr×D
3、按鲜重计算：
单位定义：37℃每克组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0234)÷0.007]÷(W×V1÷V)÷T×D
=178.6×(ΔA+0.0234)÷W×D
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入反应体系中样本体积，0.04mL；
T---反应时间，20min；
W---样本鲜重，g。
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（
5mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天
内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根据实际样本来
调整标准品浓度。
3 按照：40μL 标准品+200μL 试剂一+100μL 试剂三，依次加样操作，95℃水浴 10min，
冷却后，取 200μL 至 96 孔板中，540nm 下测定，根据结果即可制作标准曲线。
文献和实验
