本试剂盒仅供科研使用
蔗糖磷酸化酶（Sucrose Phosphorylase, SP）试剂盒说明书
（货号：WS4150F 分光法 48 样）
一、产品简介：
蔗糖磷酸化酶(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，是一种葡萄糖基转移酶，催化葡萄糖基转移到
果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相应的葡萄糖基低聚糖。在食品，化妆品，医药行业具有广泛的应
用。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：蔗糖磷酸化酶以磷酸为受体，催化蔗糖产生 1-磷酸
葡萄糖，在相应酶混合物的作用下使 NADP+还原成 NADPH，进而与特异的显色剂反应，产生在 450nm 有
最大吸收峰的黄色物质，可算出蔗糖磷酸化酶（SP）的活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 25mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
临用前加 1.8mL 蒸馏水溶解，仍-20℃保存
试剂三
液体 23μL×1 支
-20℃保存
临用前加 1.8mL 蒸馏水溶解，仍-20℃保存
试剂四
液体 1.8mL×1 支
4℃保存
试剂五
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用前加 8.3mL 蒸馏水溶解，仍 4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、天平、低温离心机、
研钵、冰、蒸馏水。
四、蔗糖磷酸化酶（SP）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取
上清液置于冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/真菌样本：
取约 500 万个细胞，加入 1mL 提取液，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3S，
间隔 5S，总时间 3min）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清液置于冰上待测
【注】：若增加样本量，按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取
2、 上机检测：
1 可见分光光度计预热 30min，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
2
所有试剂在检测前解冻至常温（25℃）状态。
③ 在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
35
试剂一
385
试剂二
35
试剂三
35
试剂四
35
试剂五
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2
室温（25℃）下反应，混匀后，立即于 450nm 处读
取吸光值 A1，40S 后读取 A2。△A=A2-A1。
【注】：1 若△A 值在零附近，可以适当延长反应时间，每隔 20s 读取一次吸光值，选择吸
光值呈线性增长的一段反应时间 T，重新确定的 T 需代入计算公式重新计算。
2 若样本做特殊处理或本身含有高浓度的还原型物质（如维生素 C 等，），需加设一
个样本自身对照（对照加样顺序：35μL 样本+560μL 试剂一+35μL 试剂二+35μL
试剂三+35μL 试剂四）
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 1.2904x + 0.0116，x 是 NADPH 摩尔质量：μmoL/mL，y 是ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义：在 25℃条件下，每毫克蛋白质每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
SP 活性（nmol/min /mg prot）=[(ΔA-0.0116)÷1.2904×V1×103] ÷(Cpr×V1)÷T
=1162.4×(ΔA-0.0116)÷Cpr
3、按照样本质量计算
单位定义：在 25℃条件下，每克样本每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
SP 活性（nmol/min /g 鲜重）=[(ΔA-0.0116)÷1.2904×V1×103] ÷(W×V1÷V)÷T
=1162.4×(ΔA-0.0116)÷W
4、 按照细胞数量计算
单位定义：在 25℃条件下，每 104个细胞每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
SP 活性（nmol/min/104 cell）=[(ΔA-0.0116)÷1.2904×V1×103]÷(500×V1÷V)÷T
=2.32×(ΔA-0.0116)
V----加入提取液体积，1 mL；
V1----反应体系中样本体积，0.035mL；
W----样本质量，g；
T----反应时间，40s=2/3 min；
Cpr----蛋白浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
注意事项：
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸馏水（母液需在两
天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol/μL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 依据加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
文献和实验
