幼虫芽胞杆菌(美洲蜂幼虫腐臭病)PCR试剂盒

幼虫芽胞杆菌(美洲蜂幼虫腐臭病)PCR试剂盒
产品及特点： 
幼虫芽孢杆菌（Bacillus larvae）是引起美洲蜂幼虫腐臭病（Americanfoul brood）的病原。美洲蜂幼虫腐臭病又名烂子病，是蜜蜂幼虫和蛹的一种细菌性、急性、毁灭性病害。特征为病蜂的蜂盖子脾下陷、穿孔、封盖幼虫死亡、蛹虫现象等。美洲蜂幼虫腐臭病最初发生于英国，以后传到欧美各国，截止至 2011 年全世界均有发生。美洲蜂幼虫腐臭病不但危害性大，而且一旦发生就很难根除。轻者影响蜂群繁殖和采集力，重者造成蜂群的覆灭，因此幼虫芽孢杆菌快速检测具有重要的意义。
本试剂盒根据 PCR 原理开发，它具有下列特点： 
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增幼虫芽胞杆菌（美洲蜂幼虫腐臭病），与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
6. 本产品由江蓝纯生物提供，不得用于临床诊断。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1mL(红盖)
试剂二	超纯水	1mL(亮黄色)
试剂三	幼虫芽胞杆菌（美洲蜂幼虫腐臭病）PCR引物混合液	100μL(白盖)
试剂四	幼虫芽胞杆菌(美洲蜂幼虫腐臭病)PCR阳性对照(1×10E8 /μL)	50μL(黄盖)
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存： 
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂： 
样品 DNA。
幼虫芽胞杆菌(美洲蜂幼虫腐臭病)PCR试剂盒
使用方法
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加10μL幼虫芽胞杆菌（美洲蜂幼虫腐臭病）PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）： 
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各20μL	20μL	20μL
幼虫芽胞杆菌（美洲蜂幼虫腐臭病）PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR阳性对照（幼虫芽胞杆菌（美洲蜂幼虫腐臭病）PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应（35个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。