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蛋白含量(SP)试剂盒,微板法

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  • ￥200
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  • WS2340W
  • 国内
  • 2025年07月28日
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    • 英文名：

      Protein Content (SP) Kit

    • CAS号：

      WS2340W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    双缩脲法蛋白含量测定试剂盒说明书
    (货号：WS2340W 微板法 96 样)
    一、产品简介：
    在碱性溶液中，凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH2)或与此相似基团的化合
    物均与二价铜离子作用，络合物呈紫色，这一反应称双缩脲反应。蛋白质分子含有众多肽
    键(—CONH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比，
    经光谱扫描 540nm 为最大吸波长。
    二、试剂盒组分与配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂 A
    液体 9mL×1 瓶
    4℃避光保存
    依据实验用量，临用前试剂
    A:B:超纯水=5:3:2 的比例混匀
    成反应 mix，4℃避光保存两周。
    试剂 B
    液体 5.5mL×1 瓶
    4℃保存
    标准品
    液体 1mL×1 支
    4℃保存
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温水浴锅（恒温培养箱）、移液器和蒸馏水。
    四、蛋白含量测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清，
    即待测液。
    ② 细菌或细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
    超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），
    12000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。
    ③ 液体样本：澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测
    ① 酶标仪预热 30min，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。
    ② 可先取 2 个样本预测，确定适合本批样本的浓度，若需要可用蒸馏水进行稀释，稀释
    倍数 D 代入公式计算。
    ③ 在 2mL 的 EP 管中依次加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    标准管
    （只做一次）
    空白管
    （只做一次）
    样本
    20
    标准品
    20
    蒸馏水
    20
    反应 mix
    180
    180
    180
    混匀，于 37℃保温 10min，全部转移到 96 孔板，
    于 540nm 处测定吸光值 A，△A= A 测定-A 空白。本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算：
    1、蛋白含量(mg/g 鲜重)=(C 标准×V1)×△A÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V)×D
    =10×△A÷(A 标准-A 空白)÷W×D
    2、蛋白含量 (mg/mL)=(C 标准×V1)×△A÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V)×D
    =10×△A÷(A 标准-A 空白)×D
    3、蛋白含量(μg/104 cell))=(C 标准×V1)×△A÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×500)×D
    =0.02×△A÷(A 标准-A 空白)×D
    C 标准---蛋白标准品浓度，10mg/mL；
    V---提取液体积：1mL；
    V1---加入粗提液体积：0.02mL；
    W---样本质量：g；
    D---稀释倍数；
    500--细菌或细胞总数，500 万。
    注意事项：
    1 本法可测定范围为 1-10mg 蛋白质，适用于精度不高的蛋白质含量测定。
    2 硫酸铵、Tris 缓冲液、EDTA、PVP 和一些氨基酸等物质会对测定造成干扰。
    3 工作液长期放置后若有暗红色沉淀出现，即不能使用。

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