① 按常规Western blot操作进行,二抗孵育后,在进行最后一次洗涤时根据膜的大小(每10 cm2膜混合0.5 mL Solution A和0.5 mL Solution B),按照Solution A: Solution B=1:1比例配制发光检测工作液。 注:工作液建议现配现用,配制后室温放置数小时后灵敏度可能略有降低。 ② 用平头镊子将膜取出,膜的下缘轻轻接触吸水纸,以去除膜上多余的液体。膜的蛋白面朝上,用吸管将配制的发光检测液转移到蛋白膜上,使其均匀覆盖,室温孵育2 分钟。 注:增加孵育时间不会增加灵敏度,有时还会导致条带曝光时显示异常。发光过程的本质是酶促反应,加入发光液过少同样不利反应进行,会导致膜上条带曝光不均和灵敏度明显降低。 ③用平头镊子夹持蛋白膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,以去除膜上多余的发光液。将膜的蛋白面朝上并包裹于洁净保鲜膜内,轻轻赶出气泡。 ④ 压片检测:将膜固定在暗盒后,暗房内取出X光胶片放置暗盒中压片1分钟,立即显影定影,根据其曝光结果,缩短或延长下一张X光胶片的压片时间。 ⑤ 化学发光成像仪检测:将膜直接放置于化学发光成像仪载物台中,然后参考仪器的说明书进行信号检测。
● 温馨提示 ① Solution A和Solution B在吸取过程中必须要更换枪头,两种溶液相互污染后会导致逐渐失效,影响后续的使用效果; ② 各溶液使用后,请盖紧瓶盖,以防失效; ③ ECL的荧光持续时间很长,但开始反应后的30分钟内荧光更强一些,随后荧光会逐渐减弱,因此请注意充分利用这荧光较强的30分钟进行压片; ④ 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作; ⑤ 本产品仅供科研使用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内!