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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
soil α- Xylosidase Reagent Kit
- CAS号:
WS3330W
- 保质期:
3个月
- 供应商:
上海瓦兰生物
- 保存条件:
4℃
- 规格:
48T
本试剂盒仅供科研使用
土壤α-木糖苷酶(Solid-β- xylosidase)测定试剂盒说明书
(货号:WS3330W 微板法 48 样)
一、产品简介:
α-木糖苷酶(EC 3.2.1.177)是一类木聚糖降解水解酶,存在于微生物等生物体,促使非
还原末端α-D-木糖残基的水解,释放出α-D-木糖。
土壤中α-木糖苷酶催化对硝基*酚-α-D-木糖苷产生对硝基*酚(PNP),该产物在
405nm 处有特征吸收峰,通过测定 405nm 光吸收增加速率,即可计算土壤α-木糖苷酶活
性。
二、试剂盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部,
再加 1.4mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
液体 6mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液 22mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、蒸馏水。
四、土壤α-木糖苷酶活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本的制备:
取新鲜土样风干或者 37℃烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网备用。
【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
2、上机检测:
① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm。
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称
测定管
对照管
土样(
g)
0.1
0.1
试剂一(
μL)
25
蒸馏水
25
试剂二(
μL)
55
55
混匀, 45℃振荡反应 30min
试剂三(
μL)
220
220
混匀,12000rpm,离心 10min,取上清液 200μL 于 96 孔板中,405nm
下读取吸光值 A,△A= A 测定- A 对照(每个样本需做一个自身对照)。
【注】:1.若ΔA 过小,可以增加土样量或延长保温时间(如:60min 或更长),重新调整的
样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
2.若 A 测定超过 1.5,可以减少土样量或降低保温时间(如:10min),重新调整的
样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
2
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y=0.2647x-0.0058;x 为标准品质量(
μg),y 为吸光值ΔA。
2、单位定义:每小时每克土样中产生 1μg 对-硝基*酚(PNP)定义为一个酶活力单位。
土壤α-木糖苷酶活性(μg/h/g 土样)=(ΔA+0.0058)÷0.2647÷W÷T=7.56×(ΔA+0.0058)÷W
T---反应时间,30min=0.5h;
W---实际称取干土质量,g;
PNP 相对分子质量---139.11。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管加入:20μL 标准品+5μL 蒸馏水+55μL 试剂二+220μL 试剂三,混匀,取 200μL
至 96 孔板中,于 405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。
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