土壤α-木糖苷酶试剂盒,微板法

土壤α-木糖苷酶试剂盒,微板法

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  • ¥2150
  • wksubio
  • WS3330W
  • 国内
  • 2025年08月05日
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      大量

    • 英文名

      soil α- Xylosidase Reagent Kit

    • CAS号

      WS3330W

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    土壤α-木糖苷酶(Solid-β- xylosidase)测定试剂盒说明书
    (货号:WS3330W 微板法 48 样)
    一、产品简介:
    α-木糖苷酶(EC 3.2.1.177)是一类木聚糖降解水解酶,存在于微生物等生物体,促使非
    还原末端α-D-木糖残基的水解,释放出α-D-木糖。
    土壤中α-木糖苷酶催化对硝基*酚-α-D-木糖苷产生对硝基*酚(PNP),该产物在
    405nm 处有特征吸收峰,通过测定 405nm 光吸收增加速率,即可计算土壤α-木糖苷酶活
    性。
    二、试剂盒组成和配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂一
    粉剂 mg×1
    4℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部,
    再加 1.4mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂二
    液体 6mL×1
    4℃保存
    试剂三
    22mL×1
    4℃保存
    标准品
    粉剂×1
    4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。
    三、所需的仪器和用品:
    酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、蒸馏水。
    四、土壤α-木糖苷酶活性测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本的制备:
    取新鲜土样风干或者 37℃烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网备用。
    【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
    2、上机检测:
    ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm
    ② 在 EP 管中依次加入:
    试剂名称
    测定管
    对照管
    土样(
    g
    0.1
    0.1
    试剂一(
    μL
    25
    蒸馏水
    25
    试剂二(
    μL
    55
    55
    混匀, 45℃振荡反应 30min
    试剂三(
    μL
    220
    220
    混匀,12000rpm,离心 10min,取上清液 200μL 96 孔板中,405nm
    下读取吸光值 AA= A 测定- A 对照(每个样本需做一个自身对照)。
    【注】:1.ΔA 过小,可以增加土样量或延长保温时间(如:60min 或更长),重新调整的
    样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
    2.A 测定超过 1.5,可以减少土样量或降低保温时间(如:10min),重新调整的
    样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算:
    1、标准曲线方程:y=0.2647x-0.0058x 为标准品质量(
    μg),y 为吸光值ΔA
    2、单位定义:每小时每克土样中产生 1μg -硝基*酚(PNP)定义为一个酶活力单位。
    土壤α-木糖苷酶活性(μg/h/g 土样)=(ΔA+0.0058)÷0.2647÷W÷T=7.56×(ΔA+0.0058)÷W
    T---反应时间,30min=0.5h
    W---实际称取干土质量,g
    PNP 相对分子质量---139.11
    附:标准曲线制作过程:
    1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
    2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际
    样本来调整标准品浓度。
    3 EP 管加入:20μL 标准品+5μL 蒸馏水+55μL 试剂二+220μL 试剂三,混匀,取 200μL
    96 孔板中,于 405nm 下读取吸光值。
    4 根据结果制作标准曲线。

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