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- WS4550W
- 国内
- 2026年01月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Trehalase Reagent Kit
- CAS号：
WS4550W
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
海藻糖酶（Trehalase，THL）试剂盒说明书
（货号：WS4550W 微板法 48 样）
一、产品简介：
海藻糖酶（EC 3.2.1.28）广泛存在于细菌、霉菌和动植物中。能够专一性的水解海藻糖
生成葡萄糖而直接用于能量供应。
海藻糖酶催化海藻糖生成葡萄糖，葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下与特异显色剂反应
生成有色物质，通过检测该有色物质的生成量，即可得出海藻糖酶的活性大小。
二、测试盒组成和配制：
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、水浴锅、低温离心机、可调式移液器、研钵、冰。
四、海藻糖酶(THL)活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g）至研钵中，加入 1mL 提取液，进行冰
浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/真菌样本：
先收集细菌或真菌到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或真菌加入 1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30
次）；4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取
③ 液体样本：澄清的液体样本，可直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 510nm。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 煮沸样本：上清液（样本）在 95-100℃煮沸 5min 即可，然后离心，上清液备用。
④ 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
100
100（煮沸样本）
试剂一
200
200
试剂二
50
50
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底部，再
加入 6mL 蒸馏水溶解备用。
试剂三
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底部，再
加入 2.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂四
液体 14mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。本试剂盒仅供科研使用
2
30℃反应 1 小时后，8000rpm 离心 10 分钟，取上清液待测。
⑤ 显色反应，在 96 孔板中依次加入：
上清液
50
50
试剂三
20
20
试剂四
130
130
40℃反应 20min，于 510nm 处读取吸光值 A，
△A=A 测定-A 对照。
【注】1.若测定管 A 值大于 1.5，可以对样本用蒸馏水进行稀释（尤其是含糖量高的果实类样本），
或者对⑤步的上清液用蒸馏水进行稀释，则稀释倍数 D 代入计算公式计算。
2.若△A 差值在零附近，可增加④步中样本的体积 V1（如增至 200μL，则试剂一相应减少），
则改变后的 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为 y = 0.106x + 0.0011；x 为标准品质量（
μg），y 为△A。
2、按照蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白在每小时催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL (μg/h/mg prot)=[(ΔA-0.0011)÷0.106×(0.35÷0.05)]÷(V1×Cpr)÷T=660.4×(ΔA-0.0011)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每小时催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL (μg/h/g 鲜重)=[(ΔA-0.0011)÷0.106×(0.35÷0.05)]÷(W×V1÷V)÷T=660.4×(ΔA-0.0011)÷W
4、按细菌或真菌密度计算：
酶活定义：每 1 万个细菌或真菌每小时催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL (μg/h/104cell)=[(ΔA-0.0011)÷0.106×(0.35÷0.05)]÷(500×V1÷V)÷T=1.321×(ΔA-0.0011)
5、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体每小时催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL (μg/h/mL)= [(ΔA-0.0011)÷0.106×(0.35÷0.05)]÷V1÷T=660.4×(ΔA-0.0011)
V--提取液体积，1 mL；V1--样本体积：0.1mL；W--样本质量，g；T--反应时间，1 小时；
500--细菌或真菌数量，500 万；0.35--第④歩反应的总体积；0.05--第⑤歩反应上清液体积；
Cpr--样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL
蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖（母液需在两天内用且-20℃保存）。
2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度：0, 0.04,0.08,0.12,0.16, 0.2mg/mL。
3 于第⑤歩显色反应阶段：50μL 标准品+20μL 试剂三+130μL 试剂四，40℃反应 20min，
于 510nm 处读取吸光值 A，依据结果即可制作标准曲线。
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文献和实验相关实验
葡萄糖苷酶（glucosidase）的一种，对海藻糖有特异作用，水解后成为 2个分子的葡萄糖， EC3． 2． 1． 28。广泛存在于细菌、霉菌、植物和动物中。在人，除肾脏、肠、肝脏、胆腋和尿以外，在血浆α 2- 球蛋白部分中，也可检出其活性，特别是在肾脏中活性很强。
8.7 食物可以改变基因？武大学者最新研究发现动物食性转变的指示基因
糖。因此，海藻糖酶对于食虫哺乳动物非常重要，不可或缺；对于其它食性的哺乳动物，可能不太重要。为了检验这个假说，来自武汉大学生科院的研究人员首次发现，海藻糖酶基因与哺乳动物食性分化密不可分，能预测食性进化历史。因此，海藻糖酶基因可以作为哺乳动物食性转变的指示基因，对于动物食性的进化及其生态学意义具有重要价值。原文检索：Trehalase gene as a molecular signature of dietary diversification in mammals ② miR- 153 促进成年海马
海藻糖酶(Trehalase)试剂盒,微板法
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