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细胞凋亡
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XSL
细胞凋亡途径中各事件的发生是有时序性的,即各事件按先后顺序依次发生,最终导致凋亡小体的出现,细胞随着发生凋亡。
其典型特征如下:
早期凋亡:细胞膜结构发生改变,磷脂酰丝氨酸外翻;
早中期凋亡:细胞质密度增加,线粒体膜电位消失细胞膜,通透性改变,释放细胞色素C到胞浆中;
中晚期凋亡:细胞凋亡信号转导;
晚期凋亡:DNA降解为180~200bp片段大小。
坏死的细胞PS同样也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面,Annexin-V也能识别坏死细胞表面的PS,所以Annexin-V 无法区分坏死细胞和凋亡细胞。另外碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,能够与细胞内DNA结合,而且它不能透过完整的细胞膜。早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整,PI染料无法自由通过细胞膜进入细胞内与DNA结合,所以PI 染料无法标记凋亡细胞和活细胞,而PI染料却能够通过坏死细胞的细胞膜与细胞内的DNA结合,坏死细胞内的PI染料被488nm激光激发后会发射红荧光,被相应通道接收。所以Annexin V和PI同时使用,就可以区分活细胞、早期凋亡细胞和坏死细胞。
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文献和实验bdvetywz 各位战友 1想证实病毒感染小鼠后脑组织中是否存在凋亡并且要定量,有什么办法? 2 如何做凋亡通路?需要测哪些指标,采用什么办法? magichunter 1.免疫组化,tunnel 2.主要为western(caspase系列,bcl-2,bax,MAPKs,指标太多了) bdvetywz 主要可以测哪些指标 magichunter
检测的金标准应该是电镜结果,tunnel不应算是金标准,因为容易出现假阳性,另外现在DNA ladder基本已经不用了,因为并非所有的细胞凋亡都会出现ladder。所以我认为凋亡检测最好有电镜结果,如果没有的话可以用annexin v-pi双染进行早期凋亡和晚期凋亡的检测,然后加上western的凋亡蛋白定量表达结果(BCl-2,bcl-xl,bax,bad,caspase系列)这样做即定量,又可以区分早期和晚期凋亡,此外还有利于解释凋亡的发生机制,应该比较好。 ycdwbj
一、细胞凋亡与细胞坏死的的区别细胞程序性死亡 概念:细胞程序死亡(programmed cell death,PCD)也常常被称为细胞凋亡,是生物体发育过程中普遍存在的,是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因 子刺激时,受基因调控启动的自杀保护措施,包括一些分子机制的诱导激活和基因编程,通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。而细胞发生程序性死亡时,就像树叶或花的自然凋落一样,凋亡的细胞散在于正常组织细胞中,无炎症反应,不遗留瘢痕。死亡的细胞
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