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细胞凋亡

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  • 细胞凋亡(apoptosis)一般是指机体细胞在发育过程中或在某些因素作用下,通过细胞内基因及其产物的调控而发生的一种程序性细胞死亡(programmed cell death)。细胞凋亡对胚胎发育及形态发生(morphogenesis)、组织内正常细胞群的稳定、机体的防御和免疫反应、疾病或中毒时引起的细胞损伤、老化、肿瘤的发生进展起着重要作用,并具有潜在的治疗意义。
  • 2025年07月12日
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    细胞凋亡(apoptosis)一般是指机体细胞在发育过程中或在某些因素作用下,通过细胞内基因及其产物的调控而发生的一种程序性细胞死亡(programmed cell death)。细胞凋亡对胚胎发育及形态发生(morphogenesis)、组织内正常细胞群的稳定、机体的防御和免疫反应、疾病或中毒时引起的细胞损伤、老化、肿瘤的发生进展起着重要作用,并具有潜在的治疗意义。

    细胞凋亡途径中各事件的发生是有时序性的,即各事件按先后顺序依次发生,最终导致凋亡小体的出现,细胞随着发生凋亡。
    其典型特征如下:
    早期凋亡:细胞膜结构发生改变,磷脂酰丝氨酸外翻;
    早中期凋亡:细胞质密度增加,线粒体膜电位消失细胞膜,通透性改变,释放细胞色素C到胞浆中;
    中晚期凋亡:细胞凋亡信号转导;
    晚期凋亡:DNA降解为180~200bp片段大小。
     
    凋亡早期:Annexin-V/PI双染色法(PS在细胞外膜上的检测)
    在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,细胞发生凋亡时,细胞膜发生变化,PS 从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面。Annexin-V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。用荧光素(FITC、Alexa Fluor488等)标记的Annexin-V作为探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜即可鉴别凋亡细胞和活细胞。
    坏死的细胞PS同样也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面,Annexin-V也能识别坏死细胞表面的PS,所以Annexin-V 无法区分坏死细胞和凋亡细胞。另外碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,能够与细胞内DNA结合,而且它不能透过完整的细胞膜。早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整,PI染料无法自由通过细胞膜进入细胞内与DNA结合,所以PI 染料无法标记凋亡细胞和活细胞,而PI染料却能够通过坏死细胞的细胞膜与细胞内的DNA结合,坏死细胞内的PI染料被488nm激光激发后会发射红荧光,被相应通道接收。所以Annexin V和PI同时使用,就可以区分活细胞、早期凋亡细胞和坏死细胞。
     

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      bdvetywz 各位战友 1想证实病毒感染小鼠后脑组织中是否存在凋亡并且要定量,有什么办法? 2 如何做凋亡通路?需要测哪些指标,采用什么办法? magichunter 1.免疫组化,tunnel 2.主要为western(caspase系列,bcl-2,bax,MAPKs,指标太多了) bdvetywz 主要可以测哪些指标 magichunter

    • 【求助】细胞凋亡

      检测的金标准应该是电镜结果,tunnel不应算是金标准,因为容易出现假阳性,另外现在DNA ladder基本已经不用了,因为并非所有的细胞凋亡都会出现ladder。所以我认为凋亡检测最好有电镜结果,如果没有的话可以用annexin v-pi双染进行早期凋亡和晚期凋亡的检测,然后加上western的凋亡蛋白定量表达结果(BCl-2,bcl-xl,bax,bad,caspase系列)这样做即定量,又可以区分早期和晚期凋亡,此外还有利于解释凋亡的发生机制,应该比较好。 ycdwbj

    • 细胞凋亡知识

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